申请/专利权人：陕西省微生物研究所

申请日：2017-02-22

公开（公告）日：2021-08-24

公开（公告）号：CN108456702B

主分类号：C12P17/06(20060101)

分类号：C12P17/06(20060101);C12R1/645(20060101)

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2021.08.24#授权;2018.09.21#实质审查的生效;2018.08.28#公开

摘要：本发明涉及一种桑黄菌丝体发酵中提高桑黄黄酮产量的方法。桑黄黄酮类化合物在体内呈现黄嘌呤氧化酶抑制活性，可有效防治痛风，并且没有毒副作用，具有高效、安全的特点。但通常的桑黄菌丝体发酵桑黄黄酮的产量很低。本发明在桑黄菌丝体发酵的对数生长后期，向发酵液中添加脱落酸。通过脱离酸诱导桑黄菌丝体产生逆境胁迫反应，使桑黄菌丝体大量合成并积累是黄酮。脱离酸的添加量为5‑10mgL。添加时间为，发酵开始后的48‑72小时。通过脱离酸的添加可以使桑黄菌丝体发酵中桑黄黄酮含量比通常额桑黄菌丝体发酵的黄酮含量提高3‑4倍。

主权项：1.一种桑黄菌丝体发酵中提高桑黄黄酮产量的方法，其特征在于：桑黄菌丝体发酵的对数生长后期，在发酵液中添加脱落酸；其目的是诱导桑黄菌丝体产生逆境胁迫反应，使桑黄菌丝体大量合成并积累黄酮；脱落酸的添加量为5-10mgL；脱落酸的添加时间为，发酵开始后的3-4天。

全文数据：桑黄菌丝体发酵中提高桑黄黄酮产量的方法技术领域[0001]本专利属于发酵领域，涉及一种桑黄菌丝体发酵中提高桑黄黄酮产量的方法。背景技术[0002]由于生活水平的不断提尚造成现代人的饮食结构和生活习惯发生较大改变，随之产生的结果就是高尿酸血症与痛风的发病率呈逐年上升趋势。有关调查资料显示我国痛风患者有7500万人，高尿酸血症患者约1•2亿，有5%〜12%发展为痛风，所有年龄阶段痛风的患病率为0.84%，且每年以0.97%的速度在增长，有年轻化发展的趋势，目前尚无法根治。痛风除可引起严重关节疼痛、畸形和肾脏损害外还常伴有或并发糖尿病、冠心病、高血压、高血脂、脑血管障碍等疾患，导致更高的致死致残率。治疗痛风病的西药如减少尿酸合成药物别嘌醇、抗炎镇痛药秋水仙碱等毒副作用大，患者依从性差，特殊危险人群增多，并发症和并用药物的相互作用，治疗达不到理想效果。桑黄黄酮类化合物具有多种生物活性，在体内呈现黄嘌呤氧化酶抑制活性，可有效防治痛风，并且没有毒副作用，具有高效、安全的特点。发明内容[0003]本发明的目的是:在桑黄菌丝体发酵中提桑黄的黄酮产量。[0004]为了实现上述目的，通常的方法是在菌丝体发酵液中添加黄酮生物合成的前体物质。如：苯丙氨酸、酪氨酸、肉桂酸和乙酸钠等。但前体的添加对菌丝生长有一定的毒害作用，过高的前体浓度反而会降低黄酮产量。一般的前体添加只能使黄酮产量提高1.5倍左右。[0005]本发明以脱离酸为黄酮诱导剂，脱落酸又被称为S-诱抗素，是生物抗逆反应中重要的信号分子，能诱导生物的抗性反应和植保素主要是萜类和黄酮类化合物）的产生。近十几年来，国内外在发酵生产中利用抗逆诱导物刺激提高目的次生代谢产物产量的研究是个热点。[0006]生长在自然环境中的生物经常遭受不良因素伤害等胁迫，为了抵御不良环境，生物细胞产生次生代谢物质，而这些次生代谢物质往往是一些具有生理活性的物质，发酵的目的就是为了大量获得这些活性物质。通常次生代谢物在生物体内的含量很低，在一般情况下不合成，在生物体培养过程中，通过优化培养基成分和调控培养条件，在一定程度上能够提高次生代谢物的产量，但幅度不大。利用生物物诱导剂可以胁迫生物体大量合成并积累次生代谢物，以抵抗这些诱导子对植物细胞带来的影响。[0007]利用脱离酸诱导桑黄发酵菌丝体提高黄酮产量，主要的优点是诱导效率高。可以使黄酮产量提高4倍左右。大量的脱离酸也会加剧细胞防御系统的负荷，从而导致细胞次生代谢系统的紊乱，同样引起次生代谢产物产量的降低。所以，选择适宜的脱离酸添加浓度对生物的次生代谢是十分重要的，既能在一定程度上刺激细胞发生过敏反应合成次生代谢物，又不严重影响细胞的生长。通常的脱离酸使用量5-10mgL。添加具体实施方式[0008]1、发酵培养基:蔗糖30克磷酸二氢钾1克硫酸镁1克麸皮和玉米煮沸30分钟去渣各30克加水1000毫升PH值6.52、灭菌:高压灭菌，121°C，40分钟；同时灭菌空气过滤器。[0009]3、接种:接重量10-12%，火圈保护接种。[0010]4、培养:培养温度28°C，通气量0.5:1VVmin。每12小时取样一次，观察发酵液颜色、浑浊度和气味判断发酵液是否感染杂菌。_1]5、诱导剂添加:棚发酵液体积计算浓度为5mgL的脱离酸添加量。将脱离酸溶于水中并灭菌，在发酵开始的第3天，通过火圈保护加入发酵罐。[=12]6、继续培养，发酵第7天结束。通过诱导的发酵液桑黄麵产量是普通发酵液的4倍。

权利要求：1.一种桑黄菌丝体发酵中提高桑黄黄酮产量的方法，其特征在于：桑黄菌丝体发酵的对数生长后期，在发酵液中添加脱落酸;其目的是诱导桑黄菌丝体产生逆境胁迫反应，使桑黄菌丝体大量合成并积累是黄酮。2.如权利要求1，脱离酸的添加量为5-10mgL。3.如权利要求1，脱离酸的添加时间为，发酵开始后的3-4天。

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