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申请/专利权人：中国科学院成都生物研究所

摘要：本发明公开了西青果提取物、西青果提取物单体化合物及其在抑制单胺氧化酶B活性中的应用。西青果TerminaliachebulaRetz.提取物XQG‑EA‑7是西青果甲醇提取物依次经石油醚、乙酸乙酯萃取，所得乙酸乙酯部分再经正相柱二氯甲烷‑丙酮‑甲酸体系梯度洗脱分离，所得组分中抑制单胺氧化酶B活性最强的部分。西青果提取物的5种单体化合物是该西青果提取物经反相柱分离得到；分离体系是中压玻璃层析柱，以水‑甲醇体系，梯度洗脱得到。本发明提供上述西青果提取物、西青果提取物5种单体化合物在抑制单胺氧化酶B活性中的应用。本发明还提供单体化合物XQG‑EA‑7‑6的HPLC鉴定方法。

主权项：1.西青果（TerminaliachebulaRetz.）提取物XQG-EA-7，其特征在于：依如下方法制备：步骤S1、西青果原料粉碎，料液比1:5，80%甲醇回流提取，滤液减压浓缩至无甲醇味，得西青果甲醇提取物；步骤S2、西青果甲醇提取物经石油醚萃取，分离，水相经乙酸乙酯萃取，分离，有机相浓缩得乙酸乙酯部分；步骤S3、乙酸乙酯部分经甲醇溶解，经正相柱、常压下二氯甲烷-丙酮-甲酸体系梯度洗脱分离，洗脱梯度为：二氯甲烷-丙酮-甲酸＝15:1:0.1、6.6h，12:1:0.1、6.6h，10:1:0.1、6.6h，8:1:0.1、6.6h，6:1:0.1、6.6h，4:1:0.1、6.6h，2:1:0.1、6.6h，1:1:0.1、6.6h，0:1:0.1、6.6h，分离所得组分中，抑制单胺氧化酶B活性最强的部分即为西青果提取物XQG-EA-7。

全文数据：西青果提取物、西青果提取物单体化合物及其在抑制单胺氧化酶B活性中的应用技术领域[0001]本发明涉及西青果提取物、西青果提取物单体化合物，以及两者在抑制单胺氧化酶B活性中的应用。属于天然产物化学领域。背景技术[0002]单胺氧化酶MAO是位于神经元和非神经元细胞线粒体外膜的氧化还原酶，能催化内源性单胺神经递质与胺异生素的氧化脱氨。人体内含有两种单胺氧化酶，分别是单胺氧化酶AMO-A、单胺氧化酶BMO-BIAO活性的变化与某些中枢神经系统疾病和外周神经系统疾病有关。异常MO-A活动与抑郁、焦虑和精神紊乱有关，而患有阿尔茨海默病、亨廷顿病、帕金森病的病人脑内的MO-B活性异常升高。[0003]单胺氧化酶B存在于动物的多种组织中，如肝、肾、脑、甲状腺等。在脑5-羟色胺能神经元、组胺能神经元和神经胶质细胞中，能够催化多巴胺、血清素等单胺类神经递质氧化脱氨基生成相应的醛和过氧化氢;在肝脏中，主要催化苄胺、苯乙基胺、酪胺等外源胺生成二氧化碳及氨；它还可氧化环境毒素1-甲基-4-苯基-1，2,3,6-四氢吡啶MPTP生成1-甲基-4-苯基P比啶MPP+，MPP+是一种能够抑制线粒体功能并导致多巴胺能神经元退化的神经毒素。MAO-B抑制剂通过抑制单胺氧化酶B的活性，减少多巴胺分解代谢，提高突触间隙多巴胺浓度，从而改善帕金森病的症状。临床上，MAO-B抑制剂如司来吉兰、雷沙吉兰已被用于治疗帕金森病。然而，司来吉兰有选择性差、不良反应大的缺点，能增加高血压和心脏病发生率，其在体内会代谢为安非他命类的衍生物，有中枢兴奋的毒副作用；雷沙吉兰对两种MAO选择性不够强，同时其对酶活性抑制的不可逆性仍然不是理想的药物。因此，从天然资源中寻找更好的MO-B抑制剂对于药物发现具有重要意义。[0004]西青果是我国传统药材，主要分布于巴基斯坦与印度，在我国主要分布于广东、云南等地区。传统医药对西青果药用功效的使用主要集中在清热生津、解毒涩肠，现代医药对西青果的化学成分及相应生物活性研究较少，对于西青果的生物活性潜质挖掘不足。尚无文献报道西青果对单胺氧化酶B的抑制活性。发明内容[0005]本发明的目的就是针对现有技术的不足，提供西青果提取物、西青果提取物5种单体化合物在抑制单胺氧化酶B活性中的应用，以及一种西青果提取物单体化合物。[0006]为实现上述目的，本发明首先提供西青果（TerminaliachebulaRetz.提取物XQG-EA-7,技术方案如下：[0007]西青果TerminaliachebulaRetz.提取物XQG-EA-7,其特征在于:是西青果甲醇提取物依次经石油醚、乙酸乙酯萃取，所得乙酸乙酯部分再经正相柱二氯甲烷-丙酮-甲酸体系梯度洗脱分离，所得组分中抑制单胺氧化酶B活性最强的部分。[0008]上述西青果TerminaliachebulaRetz.提取物XQG-EA-7具体制备方法是：[0009]步骤SI、西青果原料粉碎，料液比1:5，80%甲醇回流提取，滤液减压浓缩至无甲醇味，得西青果甲醇提取物；[0010]步骤S2、西青果甲醇提取物经石油醚萃取，分离，水相经乙酸乙酯萃取，分离，有机相浓缩得乙酸乙酯部分；[0011]步骤S3、乙酸乙酯部分经甲醇溶解，HPLC正相柱二氯甲烷-丙酮-甲酸体系梯度洗脱分离，分离所得组分中，抑制单胺氧化酶B活性最强的部分即为西青果提取物XQG-EA-7;所述二氯甲烷-丙酮-甲酸体系浓度为15:1:0.1〜0:1:0.1。[0012]上述西青果提取物XQG-EA-7,是西青果甲醇提取物依次经石油醚、乙酸乙酯萃取，所得乙酸乙酯部分再经HPLC二氯甲烷-丙酮-甲酸体系梯度洗脱分离，所得分离组分中抑制单胺氧化酶B活性最强的部分。该西青果提取物XQG-EA-7经试验证明，能够抑制单胺氧化酶B活性。因而，本发明同时提供如下技术方案：[0013]西青果TerminaliachebulaRetz.提取物XQG-EA-7在抑制单胺氧化酶13活性中的应用。[0014]本发明同时提供西青果提取物的5种单体化合物，其技术方案如下：[0015]西青果（TerminaliachebulaRetz·提取物单体化合物乂^^4-7_2、乂^^厶-7-3、父〇644-7-54〇644-7-64〇644-7-7，其特征在于:是上述的西青果提取物乂〇644-7经反相柱分离得到;所述分离体系是中压玻璃层析柱，以水-甲醇体系，水-甲醇=3:1〜0:1，梯度洗脱。[0016]上述单体化合物XQG-EA-7-2、XQG-EA-7-3、XQG-EA-7-5、XQG-EA-7-6、XQG-EA-7-7的获得，是:首先，制备西青果提取物XQG-EA-7;其次，将西青果提取物XQG-EA-7用尽量少的25%甲醇溶解，湿法上样，中压玻璃层析柱，柱温:室温，流速:2mlmin，压力：1.5MPa，以水-甲醇体系梯度洗脱，具体洗脱条件:水-甲醇=2:l、3.3h，水-甲醇=3:2、3.3h，水-甲醇=1:1、3.311，水-甲醇=2:3、3.311，水-甲醇=3:7、3.311，水-甲醇=1:4、3.311，水-甲醇=1:9、3.3h，水-甲醇=0:l、3.3h。[0017]上述5种西青果提取物的单体化合物经试验证明，能够抑制单胺氧化酶B活性。因而，本发明同时提供如下技术方案：[0018]西青果（TerminaliachebulaRetz·提取物任一单体化合物乂9614-7-2、父96-EA-7-3、XQG-EA-7-5、XQG-EA-7-6、XQG-EA-7-7在抑制单胺氧化酶B活性中的应用。[0019]本发明同时提供西青果提取物的单体化合物XQG-EA-7-6,该单体化合物经试验证明，能够抑制单胺氧化酶B活性。其具体技术方案是：[0020]西青果（TerminaliachebulaRetz·提取物单体化合物XQG-EA-7-6，其特征在于:是白色粉末，溶于甲醇，是权利要求1或2或3所述的西青果提取物XQG-EA-7经反相柱分离得到;所述分离体系是中压玻璃层析柱，以水-甲醇体系，水-甲醇=3:1〜0:1，梯度洗脱。[0021]本发明同时提供西青果提取物单体化合物XQG-EA-7-6的HPLC鉴定方法，其技术方案如下：[0022]西青果提取物单体化合物XQG-EA-7-6的HPLC鉴定方法，其特征在于：[0023]样品处理:取西青果提取物XQG-EA-7-6溶解于50%甲醇中；[0024]HPLC检测体系:C18柱、柱温35°C、流速0.8mLmin、表1所示洗脱条件：[0025]表IHPLC洗脱条件[0026][0027]~紫外检测波长254nm。'''[0028]与现有技术相比，本发明的有益效果是：（1提供了西青果提取物XQG-EA-7及其中的5种单体化合物XQG-EA-7-2、XQG-EA-7-3、XQG-EA-7-5、XQG-EA-7-6、XQG-EA-7-7。（2提供了西青果提取物XQG-EA-7及其中的5种单体化合物XQG-EA-7-2、XQG-EA-7-3、XQG-EA-7-5、XQG-EA-7-6、XQG-EA-7-7在抑制单胺氧化酶B活性中的应用。⑶提供了一种单体化合物XQG-EA-7-6,该物质从西青果中提取分离得到，具有抑制单胺氧化酶B活性的功效。附图说明[0029]图1是西青果提取物XQG-EA-7硅胶薄层板点板分析结果图。[0030]图2是西青果提取物XQG-EA-7、西青果提取物单体化合物乂0644-7-24064六-7-3、XQG-EA-7-5、XQG-EA-7-6、XQG-EA-7-7的HPLC色谱图。[0031]图3是XQG-EA-7-2的MS图谱。[0032]图4是XQG-EA-7-3的MS图谱。[0033]图5是XQG-EA-7-5的MS图谱。[0034]图6是XQG-EA-7-6的MS图谱。[0035]图7是XQG-EA-7-7的MS图谱。具体实施方式[0036]下面结合附图，对本发明的优选实施例作进一步的描述。[0037]实施例一[0038]西青果（TerminaliachebulaRetz·提取物XQG-EA-7制备。[0039]1、西青果甲醇提取[0040]西青果原料250g，清洗、粉碎;80%甲醇提取，料液比（重量比）1:5,甲醇回流提取三次，其提取时间分别为2h、l.5h、lh，合并三次滤液，滤液减压浓缩至无甲醇味。取Iml浓缩液蒸干计算其质量，计算出总提取物的质量为97.9g，算出西青果的提取率为39.16%。[0041]2、萃取[0042]总提取物取Ig留样，剩下96.9g依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取。分别浓缩各部分萃取溶液得到石油醚PET部分0.54g、乙酸乙酯EA部分42.18g、正丁醇NBA部分34.00g、水H2O部分19.38g。[0043]3、乙酸乙酯部分的正相柱分离[0044]西青果甲醇提取物经石油醚萃取，分离，水相经乙酸乙酯萃取，分离，有机相浓缩得乙酸乙酯部分；[0045]取35g乙酸乙酯部分经甲醇溶解，与70g硅胶300〜400目）拌样，并置于通风橱中挥干。取Ikg硅胶干法装柱，将填料敲紧填实，然后将上层已经挥干的硅胶缓慢倒入柱中。过柱分析条件为展开剂为二氯甲烷:丙酮：甲酸=5:1:1。显色剂:典显。正相柱分离体系:常压玻璃层析柱:高75cm、内径8cm、外径8.7cm，柱温:室温，流速：15mlmin，压力：常压，二氯甲烷-丙酮-甲酸体系梯度洗脱（15:1:0.1〜0:1:0.1，具体条件:二氯甲烷-丙酮-甲酸（15:1:0.16.611，二氯甲烷-丙酮-甲酸（12:1:0.16.611，二氯甲烷-丙酮-甲酸（10:1:0.16.611，二氯甲烷-丙酮-甲酸8:1:0.16.6h，二氯甲烷-丙酮-甲酸6:1:0.16.6h，二氯甲烷-丙酮-甲酸4:l:0.16.6h，二氯甲烷-丙酮-甲酸2:l:0.16.6h，二氯甲烷-丙酮-甲酸（1:1:0.16.6h，二氯甲烷-丙酮-甲酸0:l:0.16.6h。[0046]洗脱得7个组分，分别命名为XQG-EA-I、XQG-EA-2、XQG-EA-3、XQG-EA-4、XQG-EA-5、XQG-EA-6、XQG-EA-7。[0047]采用犬尿胺试验试验操作同试验例一分别检测7个组分抑制MAO-B活性的能力，结果显示XQG-EA-7抑制性最为强。[0048]实施例二[0049]单体化合物XQG-EA-7-2、XQG-EA-7-3、XQG-EA-7-5、XQG-EA-7-6、XQG-EA-7-7制备及鉴定。[0050]l、XQG-EA-7-2、XQG-EA-7-3、XQG-EA-7-5、XQG-EA-7-6、XQG-EA-7-7反相柱分离制备[0051]取60gC18反相硅胶溶于甲醇，浸泡过夜后装柱。装完以后，用400mL甲醇冲洗色谱柱，然后用起始流动相（水：甲醇=3:1400mL平衡色谱柱。取实施例一所得西青果提取物XQG-EA-72g样品，用尽量少的25%甲醇溶解，湿法上样。中压玻璃层析柱：高75cm、内径2.5cm、外径3cm，柱温:室温，流速:2mlmin，压力：1.5MPa，以水-甲醇体系梯度洗脱（3:1〜〇:1，具体洗脱条件:水-甲醇（2:13.3h，水-甲醇（3:23.3h，水-甲醇（1:13.3h，水-甲醇2:33.3h，水-甲醇（3:73.3h，水-甲醇（1:43.3h，水-甲醇（1:93.3h，水-甲醇（0:13.3h〇[0052]洗脱样品用硅胶薄层板点板分析，展开剂为水：甲醇=3:2,显色剂:典显，总共得至IJ7个部分，分别命名为父〇64厶-7-1’、父〇64厶-7-2’、父〇64厶-7-3’、父〇64厶-7-4’、父〇64厶-7-5’、父〇64六-7-6’、乂〇64六-7-7’，结果如图1所示，从左到右依次为乂〇64六-7、乂〇64六-7-1’、XQG-EA-7-2’、XQG-EA-7-3’、XQG-EA-7-4’、XQG-EA-7-5’、XQG-EA-7-6’、XQG-EA-7-7’。其中，XQG-EA-7-2’、XQG-EA-7-3’、XQG-EA-7-5’、XQG-EA-7-6’、XQG-EA-7-7’分别各析出一个单体化合物，分别命名为XQG-EA-7-2、XQG-EA-7-3、XQG-EA-7-5、XQG-EA-7-6、XQG-EA-7-7。[0053]2、XQG-EA-7-2、XQG-EA-7-3、XQG-EA-7-5、XQG-EA-7-6、XQG-EA-7-7的HPLC分析及结构鉴定[0054]2.IHPLC分析[0055]样品处理：取上述所得XQG-EA-7-2、XQG-EA-7-3、XQG-EA-7-5、XQG-EA-7-6、XQG-EA-7-7各2g溶解于50%甲醇中。[0056]色谱柱为AgilentC18250mmX4.6mm，5ym;流动相为甲醇流动相B与0·1%磷酸流动相A，流速0.8mLmin，紫外检测波长254nm，柱温35°C，洗脱条件见表UHPLC色谱图如图2所示。[0057]表I5个单体化合物HPLC洗脱条件[0058][0059]~2.2质谱结构鉴定'''[0060]质谱检测操作条件:溶剂:50%甲醇、鞘气：5arbs、进样速度:5μ1πΰη、离子源：电喷雾离子源、负离子模式:2500ν、质量分析器:三通四级杆。[0061]乂961厶-7-2、父064厶-7-3、父061厶-7-5、父061厶-7-7分子离子峰分别为633.21、651.32、953.23、301.20,通过与文献对比鉴定他们所对应的化合物分别是柯里拉京、诃子宁、诃黎勒酸、鞣花酸，XQG-EA-7-6是未知成分MS图谱如图3〜图7所示）。5个单体化合物的性质如表2。[0062]表2五个单体化合物的性质[0063][0064]试验例一[0065]XQG-EA-7-2、XQG-EA-7-3、XQG-EA-7-5、XQG-EA-7-6、XQG-EA-7-7抑制单胺氧化酶B活性试验。[0066]1、主要试剂[0067]样品溶液:分别取实施例二制得XQG-EA-7-2、XQG-EA-7-3、XQG-EA-7-5、XQG-EA-7-6、XQG-EA-7-7样品各2mg，分别将样品用2ml含10%二甲基亚砜的12.5mM磷酸缓冲溶液溶角军，得lmgml原溶液，再用含10%二甲基亚砜的12.5mM磷酸缓冲溶液将其稀释至0.lmgml。[0068]酶溶液:从猪肝中提取总MAOs酶的活性为100Uml，蛋白浓度为3.55mgmL。，提取方法参考文南犬M.Matsukawa，AScreeningSystemofProdrugsSelectiveforMAO-AorMA0-B，NeuroToxicology，252004293-302.，用氯吉兰ΜΑ0-Α不可逆抑制剂）抑制总MAOs中MAO-A抑制方法参考文献YoudimMB，GrossA，FinbergJP.Rasagiline[N_propargyl-lR+-aminoindan],aselectiveandpotentinhibitorofmitochondrialmonoamineoxidaseB.[J].BritishJournalofPharmacology,2010,1322:500-506.，得到MAO-B酶活性为lOOUml，-80°C保存。临用前用PBS缓冲溶液将其稀释到工作液浓度10UmL。[0069]犬尿胺（底物）溶液：将犬尿胺溶于12.5mM磷酸缓冲溶液（pH7.4中，浓度为0.2mM〇[0070]终止剂（2molL氢氧化钠溶液）溶液：称取8g氢氧化钠，溶解后用玻璃棒引流进IOOmL容量瓶中，定容。[0071]PBS缓冲溶液：12·5mM磷酸缓冲溶液pH7·4。[0072]抑制剂溶液:氯吉兰，配制为0.lmgmL。[0073]阳性对照液:沙芬酰胺配制为0.lmgmL的溶液。[0074]2、试验操作[0075]实验方法:MAO-B活性采用荧光法测定，以犬尿胺为底物。实验分为空白组、对照组、样品空白组、样品组，各反应物按表3中剂量在96孔板中进行加样，每组3个平行。按表3依次加入PBS缓冲溶液、抑制剂溶液、酶溶液，于37°C下振摇IOmin。反应结束后，取出，加入0.2mM犬尿胺底物溶液，于37°C下振摇反应30min，结束后加入80yL终止剂终止反应。[0076]表3各反应物添加计量和顺序单位:yL[0078]由于单胺氧化酶B可以催化犬脲胺发生反应，生成荧光物质4-羟基喹啉，该化合物在激发波长3IOnm处，最大焚光发射波长为400nm。所以终止反应后在400nm处其测定其焚光强度，根据式1便可计算出各样品对MO-B的抑制率。[0079]抑制率⑴％=[I-C-DΛΑ-Β]X100%式1[0080]式中，A—没有抑制剂存在时的荧光强度值;B—仅有底物时的荧光强度值;C一酶与底物在抑制剂存在下的荧光强度值;D—没有酶存在时的荧光强度值）[0081]3、试验结果[0082]表4、主要试验数据[0084]根据试验数据计算出，当XQG-EA-7-2柯里拉京）、XQG-EA-7-3诃子宁）、XQG-EA-7-5诃黎勒酸）、XQG-EA-7-6和XQG-EA-7-7縣花酸）的浓度为0.05mgmL时，他们对MAO-B的抑制率分别为78·86%、58·55%、59·35%、49·28%、74·10%。

权利要求：1.西青果TerminaliachebulaRetz.提取物XQG-EA-7,其特征在于：是西青果甲醇提取物依次经石油醚、乙酸乙酯萃取，所得乙酸乙酯部分再经正相柱二氯甲烷-丙酮-甲酸体系梯度洗脱分离，所得组分中抑制单胺氧化酶B活性最强的部分。2.根据权利要求1所述的西青果提取物XQG-EA-7，其特征在于:依如下方法制备：步骤SI、西青果原料粉碎，料液比1:5，80%甲醇回流提取，滤液减压浓缩至无甲醇味，得西青果甲醇提取物；步骤S2、西青果甲醇提取物经石油醚萃取，分离，水相经乙酸乙酯萃取，分离，有机相浓缩得乙酸乙酯部分；步骤S3、乙酸乙酯部分经甲醇溶解，正相柱流动相二氯甲烷-丙酮-甲酸体系梯度洗脱分离，分离所得组分中，抑制单胺氧化酶B活性最强的部分即为西青果提取物XQG-EA-7;所述二氯甲烷-丙酮-甲酸体系浓度为15:1:0.1〜0:1:0.1。3.根据权利要求2所述的所述西青果提取物XQG-EA-7，其特征在于:所述步骤S3中，分离体系：常压玻璃层析柱：高75cm、内径8cm、外径8.7cm，柱温:室温，流速：15mlmin，压力：常压，梯度洗脱:二氯甲烷-丙酮-甲酸=15:1:0.l、6.6h，二氯甲烷-丙酮-甲酸=12:1:0.1、6.6h，二氯甲烷-丙酮-甲酸=10:1:0.1、6.611，二氯甲烷-丙酮-甲酸=8:1:0.1、6.611，二氯甲烷-丙酮-甲酸=6:l:0.1、6.6h，二氯甲烷-丙酮-甲酸=4:l:0.1、6.6h，二氯甲烷-丙酮-甲酸=2:l:0.1、6.6h，二氯甲烷-丙酮-甲酸=l:l:0.1、6.6h，二氯甲烷-丙酮-甲酸=0:l:0·1、6·6h〇4.权利要求1或2或3所述的西青果TerminaliachebulaRetz.提取物XQG-EA-7在抑制单胺氧化酶B活性中的应用。5.西青果TerminaliachebulaRetz.提取物单体化合物XQG-EA-7-2、XQG-EA-7_3、父〇644-7-53〇644-7-63〇644-7-7，其特征在于:是权利要求1或2或3所述的西青果提取物XQG-EA-7经反相柱分离得到;所述分离体系是中压玻璃层析柱，以流动相水-甲醇体系，水-甲醇=3:1〜0:1，梯度洗脱。6.根据权利要求5所述的西青果提取物单体7-5、XQG-EA-7-6、XQG-EA-7-7，其特征在于:依如下方法制备：首先，制备西青果提取物XQG-EA-7;其次，将西青果提取物XQG-EA-7用尽量少的25%甲醇溶解，湿法上样，中压玻璃层析柱，柱温:室温，流速:2mlmin，压力：1.5MPa，以水-甲醇体系梯度洗脱，具体洗脱条件:水-甲醇=2:1、3·3h，水-甲醇=3:2、3·3h，水-甲醇=1:1、3·3h，水-甲醇=2:3、3·3h，水-甲醇=3:7、3·3h，水-甲醇=1:4、3·3h，水-甲醇=1:9、3·3h，水-甲醇=0:1、3·3h。7.根据权利要求5或6所述的西青果提取物单体化合物乂〇644-7-23〇644-7-3、乂〇6-EA-7-5、XQG-EA-7-6、XQG-EA-7-7，其特征在于:所述单体化合物XQG-EA-7-2、XQG-EA-7-3、XQG-EA-7-5、XQG-EA-7-7分别是柯里拉京、诃子宁、诃黎勒酸、鞣花酸。8.权利要求5或6所述的西青果TerminaliachebulaRetz.提取物任一单体化合物XQG-EA-7-2、XQG-EA-7-3、XQG-EA-7-5、XQG-EA-7-6、XQG-EA-7-7在抑制单胺氧化酶B活性中的应用。9.西青果TerminaliachebulaRetz.提取物单体化合物XQG-EA-7-6,其特征在于：是白色粉末，溶于甲醇，是权利要求1或2或3所述的西青果提取物XQG-EA-7经反相柱分离得至|J;所述分离体系是中压玻璃层析柱，以水-甲醇体系，水-甲醇=3:1〜0:1，梯度洗脱。10.根据权利要求9所述的单体化合物XQG-EA-7-6的HPLC鉴定方法，其特征在于：样品处理:取西青果提取物XQG-EA-7-6溶解于50%甲醇中；冊^：检测体系:：18柱、柱温35°：、流速0.8111171^11、表1所示洗脱条件：表IHPLC洗脱条件紫外检测波长254nm。

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