买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！

申请/专利权人：上海大学

摘要：本发明涉及一种抑制Dcf1基因的表达在制备治疗肥胖药物中的应用。本发明主要是运用野生型（作为对照）和dcf1敲除两种小鼠，通过行为学检测到dcf1的缺失导致小鼠体重及饮食的减少。然后Westernblotting和免疫组化检测到NPY蛋白的下调；之后证实了dcf1位于NPY的上游。最后ATP试剂盒检测到dcf1敲除后，小鼠下丘脑组织及原代细胞ATP水平身高。在293T细胞中分别过表达dcf1与NPY,都引起细胞ATP水平下降。因此，dcf1在能量平衡上有重要作用，它可以提供一种新颖的方法来治疗肥胖。

主权项：1.Dcf1基因表达的抑制剂在制备治疗肥胖药物中的应用。

全文数据：抑制Dcf7基因的表达在制备治疗肥胖药物中的应用技术领域[0001]本发明涉及一种抑制dc7基因的表达在制备治疗肥胖药物中的应用。背景技术[0002]肥胖对人体健康有显著和广泛的影响，目前它成为了医疗保健优先事项和本世纪挑战的首要任务。遗传学研宄认为导致能量平衡失调是关键调节因子的影响，如神经肽YNPY或阿黑皮素原基因（POMC造成的影响。目前研宄表明，NPY能增加食物的摄入，降低产热效应等，而POMC行驶相反的作用，它能抑制食欲，增加能量消耗。肥胖是摄入的能量大于支出，以脂肪的形式储存并堆积导致的。目前市面上经过FDA批准的减肥药很少，主要是针对脂肪酶来起作用，但长期使用会引起脂肪泻，可造成脂溶性维生素缺乏。最近还有报道其可引起肝功能损害。[0003]树突状细胞因子（dendriticcel1factor1，dcfi，也称为跨膜蛋白59transmembraneprotein59，属于一种单次跨膜蛋白。我们之前的研宄发现dcfj在初级神经干细胞NSCs中的表达有差异，这暗示着dcfj在神经系统中行驶某角色。而神经系统中调节体重与饮食的为NPY与P0MC，如果有物质能调节这两因子，就有成为减肥药的可能。发明内容[0004]本发明的目的在于提供本发明涉及一种抑制ccfi基因的表达在制备治疗肥胖药物中的应用。[0005]本发明主要是运用野生型（作为对照）和den敲除两种小鼠，通过行为学检测到ccfi的缺失导致小鼠体重及饮食的减少。然后Westernblotting和免疫组织化学检测到NPY蛋白的下调；之后证实了dcfJ位于iVPr的上游。最后ATP试剂盒检测到dcfJ敲除后，小鼠下丘脑组织及原代细胞ATP水平身高。在293T细胞中分别过表达DCF1与NPY，都引起细胞ATP水平下降。因此，dcH在能量平衡上有重要作用，它可以提供一种新颖的方法来治疗肥胖。附图说明[0006]图1为Cicfl的敲除引小鼠体重与饮食量的下降。[0007]图2为western证实ccfl的敲除引NPY的表达下调。[0008]图3为免疫组织化学证实dcfj的敲除引NPY的表达下调。[0009]图4为ccfJ位于NPY的上游。[0010]图5为cfcfi的敲除导致ATP水平的升高，过表达引起ATP水平下降。具体实施方式[0011]下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。[0012]实施例1:所有实验在雄性小鼠（保持在一个C57BLej背景）中进行。动物出生后，dcfi--和++小鼠在第二周时单独词养并保持12小时光照06:00-18:00与12小时黑暗（18:00-06:00，控制温度24±1°C。食物和水可用自由采食并充足。所有的动物处理都按照神经科学学会准则进行。三月龄体型对比见（图1A，体重与饮食量结果见（图1B，1C。（n=28，*P1丨〇敁-100-?83通透30分钟；0.0謹PBS洗3次，每次5分钟；2%BSA-PBS室温封闭1小时；吸干2%BSA-PBS后，直接滴加PBS稀释的一抗⑽P，l:500h37°C孵育2小时，或4°C孵育过夜;吸干一抗，0.01MPBS洗3次，每次5分钟。避光条件下，加入PBS稀释的二抗稀释比例1:500。37°：孵育2小时;吸干二抗，加入PBS稀释的DAPI1:1000，室温孵育10分钟；吸干DAPI，0.01MPBS洗3次，每次5分钟;荧光封片剂封片，Confocal观察。（图3免疫组织化学NPY示意图。其中（图3，A是PVN区，（图3，C是DMH区，（图3，E是ARC区，图3B，图3D，图3F，分别是对图3A，图3C，图3E，的统计分析。所有观察区域均显示，DCF1敲除小鼠的NPY信号明显减少n=4，*P0.05;**P0.01;*P0.001。[0015]实施例4:293T细胞在DMEM+10%FBS+1%双抗）的培养基中，37。：，5%C02培养箱中培养。分别对细胞转染DCF1质粒、NPY质粒、空载、生理盐水。转染48小时后抽蛋白westerruWestern结果显示，DCF1过表达使NPY显著上调（对照组相比）（图4A，图4B，而NPY的过表达不能引起DCF1表达的变化（图4A，4C。由此，可以推断出NPY位于DCF1的下游，DCF1通过调节NPY来介导下游。（n=3，*P0.05;料P0.01;*P0.001。[0016]实施例5:用ATP检测试剂盒对相应指标进行检测。结果表明，DCF1--小鼠下丘脑中ATP在一月龄与野生型鼠无差异，在3个月龄下丘脑组织ATP含量显著增加（图5A，DCF1--鼠下丘脑原代细胞的ATP浓度也较野生型下丘脑原代细胞升高（图5BKDCF1和NPY分别在293T细胞中过表达，使293T细胞ATP浓度降低（图50。这些结果表明，DCF1的缺失会引起ATP的上升，可能是机体耗能增多，需要一个高的ATP水平来维持生命活动n=3，*P0.05;**P0_01;*P0.001。综上所述，ccfJ基因可以作治疗肥胖的药物。

权利要求：1.抑制Dcfl基因的表达在制备治疗肥胖药物中的应用。

百度查询： 上海大学 抑制Dcf1基因的表达在制备治疗肥胖药物中的应用