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申请/专利权人：中国农业科学院饲料研究所
摘要：本发明提供了一种利用GAP启动子在毕赤酵母中组成型表达靶向抗菌肽AgPlectasin的方法。本发明利用GAP启动子替换载体pPICAgPlectasin中的AOX启动子，构建组成型重组表达载体pGAPAgPlectasin并转化毕赤酵母X-33，获得的重组酵母经发酵培养，能够分泌产生AgPlectasin。本发明首次实现靶向抗菌肽AgPlectasin在毕赤酵母中组成型表达，经120小时培养后发酵液中总蛋白浓度达到532.4mgL；发酵液上清经G25脱盐和SP离子交换层析后能够得到目标产物纯品，产量为118.37mgL；经Genetools分析其纯度为93.27%。抑菌实验表明AgPlectasin对金黄色葡萄球菌ATCC标准菌株有很强抑制作用，AgPlectasin的MIC介于0.09-1.47μM。本发明所述方法获得的AgPlectasin可应用于抗菌药物、食品添加剂、化妆品、饲料添加剂等领域，具有广阔的应用价值和市场前景。
主权项：一种表达载体，其特征在于，含有毕赤酵母组成型启动子GAP、位于启动子下游的编码信号肽的核苷酸序列、编码靶向抗菌肽AgPlectasin的基因序列和TAA，TAG终止子序列，所述编码靶抗菌肽DNA序列5’端具有酵母Kex2切割识别序列AAGAGA；所述靶向抗菌肽AgPlectasin为将金黄色葡萄球菌信息素序列AgrD连接至菌丝霉素Plectasin N‑端，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示；编码靶向抗菌肽AgPlectasin的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；载体所用信号肽为α‑因子分泌信号肽α‑MF，酿酒酵母转化酶信号肽SUC2，毕赤酵母碱性磷酸酶信号肽PHO1或所需表达基因自身信号肽序列；载体所用Kex2切割位点氨基酸信息为KR，或在Kex切割位点NC‑端添加EAEA。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 中国农业科学院饲料研究所 在Pichia pastoris中组成型表达靶向抗菌肽AgPlectasin的方法
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