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龙图腾网恭喜西南交通大学申请的专利一种中风疫苗及其制备方法和应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN119792507B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-06-20发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202510295864.9，技术领域涉及：A61K39/108；该发明授权一种中风疫苗及其制备方法和应用是由郭星;幸瑞;周熙;周绍兵设计研发完成，并于2025-03-13向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种中风疫苗及其制备方法和应用在说明书摘要公布了：本发明公开了一种中风疫苗及其制备方法和应用，属于生物医药技术领域。该疫苗的制备步骤S1、将视黄酸、聚乳酸‑羟基乙酸共聚物和维生素E聚乙二醇琥珀酸酯溶解于有机溶剂A中得到溶液A；将溶液A滴加至水性溶剂B中，搅拌，得到视黄酸PLGA纳米粒；S2、将脂质和大肠杆菌外膜囊泡OMV混合，冰浴超声混合，然后脂质体挤出器挤出，得到杂化囊泡CMV；S3、将视黄酸PLGA纳米粒和CMV混合，冰浴超声混合，然后脂质体挤出器挤出，得到中风疫苗CPRA。本发明方法制得的中风疫苗粒径均匀一致，稳定性良好；注射疫苗后，外膜囊泡作为抗原，视黄酸作为反向佐剂诱导耐受性树突状细胞和Treg细胞生成，同时视黄酸诱导Treg细胞归巢肠道，作为中风发生后Treg细胞储备。

本发明授权一种中风疫苗及其制备方法和应用在权利要求书中公布了：1.一种中风疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、制备视黄酸PLGA纳米粒：将视黄酸、聚乳酸-羟基乙酸共聚物PLGA和维生素E聚乙二醇琥珀酸酯TPGS溶解于有机溶剂A中，得到溶液A；将溶液A滴加至水性溶剂B中，滴加速度为1-50滴s，以转速1-100rmin磁力搅拌数小时以蒸发去除有机溶剂A，得到视黄酸PLGA纳米粒；所述有机溶剂A包括丙酮、甲醇、乙醇、乙腈中的一种；所述水性溶剂B选自水、生理盐水、磷酸缓冲液中的一种；S2、制备杂化囊泡CMV，步骤如下；S21、提取大肠杆菌外膜囊泡OMV，方法如下：（1）构建LPS毒力基因缺失的大肠杆菌，方法如下：选择大肠杆菌Nissle1917菌株，敲除LPS毒力基因，包括LpxM、LpxL和pagP；步骤如下：设计靶向LpxM、LpxL、pagP的sgRNA序列，在Cas9蛋白切割后，使用LpxM、LpxL、pagP基因两侧的同源臂片段对DNA组进行修复；LpxM-sgRNA序列为CAGCATGGCAGGAATATCGA，详见SEQIDNo：1；LpxL-sgRNA序列为TCAGTGGATTATCGTTCGGG，详见SEQIDNo：2；pagP-sgRNA序列为TATAACGAGCGACCGTGGGG，详见SEQIDNo：3；将LpxM-sgRNA、LpxL-sgRNA、pagP-sgRNA序列分别连接在pTargetF质粒上，转入提前转染了pCas质粒的大肠杆菌Nissle1917中，构建LpxM、LpxL、pagP基因缺失的大肠杆菌Nissle1917，冻存备用；（2）取冻存的LPS毒力基因缺失的大肠杆菌Nissle1917菌液在LB固体平板上划线复苏，37℃过夜培养后挑取菌落接种于LB液体培养基，培养10h后以1:100的体积比接种于LB液体培养基中，37℃培养，将检测到OD600值在0.7-1之间时，收集菌液；菌液4℃5000g离心30min，将上清液使用100kDa超滤管浓缩，将浓缩液4℃200000g离心2h，收集沉淀即得外膜囊泡OMV；S22、将脂质和外膜囊泡OMV混合，使用超声细胞破碎仪冰浴超声混合，然后使用脂质体挤出器挤出，得到杂化囊泡CMV；S3、将视黄酸PLGA纳米粒和杂化囊泡CMV混合，使用超声细胞破碎仪冰浴超声混合，然后使用脂质体挤出器挤出，得到中风疫苗CPRA。

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