恭喜南昌大学严喜鸾获国家专利权
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龙图腾网恭喜南昌大学申请的专利一种基于自组装DNA核酸链传感器的多种肿瘤标记物化学发光快速检测方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN115754296B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-05-30发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202211453743.5,技术领域涉及:G01N33/574;该发明授权一种基于自组装DNA核酸链传感器的多种肿瘤标记物化学发光快速检测方法是由严喜鸾;王魏;朱娅妃;程诗云;刘阿花;戈文楷;束庆磊设计研发完成,并于2022-11-21向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种基于自组装DNA核酸链传感器的多种肿瘤标记物化学发光快速检测方法在说明书摘要公布了:本发明提供一种基于自组装DNA核酸链传感器的多种肿瘤标记物化学发光快速检测方法,其中利用寡核酸链和适体构建自组装DNA核酸双链,在一种或多种靶目标不同配体的存在下,利用适体与配体的强结合力使自组装DNA核酸双链瓦解,释放出相应的单链核酸链与磁性微球载体上的互补DNA单链结合,通过磁性分离,利用不同化学发光探针进行化学发光检测相应的目标物。该自组装DNA核酸双链可以在同一个初始体系中检测多种目标物,为实际应用减少了检测时间、降低了检测成本,且该自组装DNA核酸链可以替换成其他目标物的适体链或检测两个及两个以上的目标物,具有广阔的应用前景。
本发明授权一种基于自组装DNA核酸链传感器的多种肿瘤标记物化学发光快速检测方法在权利要求书中公布了:1.一种基于自组装DNA核酸链传感器的多种肿瘤标记物化学发光快速检测方法,其特征在于,涉及三磷酸腺苷适体Apt1、甲胎蛋白适体Apt2、信号DNA链1S1、桥梁DNA链B、信号DNA链2S2、与S1互补的DNA链C1、与S2互补的DNA链C2;其中,ATP可与Apt1特异性识别,AFP可与Apt2特异性识别,S1可与C1碱基互补配对,S2可与C2碱基互补配对,B主要用于辅助构造自组装DNA核酸链,C1、C2末端的氨基可与羧基修饰的磁性微球通过酰胺键结合;过程中,还使用了由链霉亲和素SA和辣根过氧化物酶HRP交联所得的辣根过氧化物酶标记链霉亲和素SA-HRP,化学发光试剂苯甲酰甲醛PG;该方法包括以下步骤:1)将Apt1、Apt2、S1、B、S2混匀,充分反应;2)将步骤1所得产物与AFP及ATP混匀,充分反应;3)通过氨羧反应将氨基修饰的C1固定在羧基磁性微球的表面,得到磁性微球-C1复合物;4)将步骤2)所得产物与过量的磁性微球-C1复合物混匀,反应后取固相;5)将步骤4)所得固相与SA-HRP混匀,充分反应,即得检测AFP的化学发光生物传感器;6)将检测AFP的化学发光生物传感器与鲁米诺-H2O2试剂混匀,而后检测化学发光CL值;7)通过氨羧反应将氨基修饰的C2固定在羧基磁性微球的表面,得到磁性微球-C2复合物;8)将步骤4)反应的剩余溶液与过量的磁性微球-C2复合物混匀,反应后取固相,即得检测ATP的化学发光生物传感器;9)将检测ATP的化学发光生物传感器与PG试剂混匀,而后检测化学发光CL值;步骤1)包括以下步骤:分别取等量6µL、100µmolL的Apt1、Apt2、S1、B、S2于1.5mL的离心管中,而后加入20µL的BA缓冲液,混匀后于80~100℃水浴锅中孵育4~6min;步骤2)包括以下步骤:取10µL、10-8µmolLAFP和10µL、10-8µmolLATP于步骤1所得溶液,混匀后于35~39℃震荡反应40~60min;步骤3)包括以下步骤:取磁性微球,利用0.05~0.2M的咪唑缓冲溶液洗涤,而后取固相重悬于含有EDC的咪唑缓冲液中,于35~39℃震荡孵育15~25min,而后以磁性微球与氨基修饰的C1用量比为4µg:(1~2)pmol的比例加入氨基修饰的C1,于35~39℃震荡反应40~60min;于35~39℃震荡反应40~60min后,取固相利用PBST缓冲溶液洗涤;利用PBST缓冲溶液洗涤后,取固相加入8~12%的BSA溶液,于35~39℃条件下震荡40~60min,而后取固相利用PBST缓冲溶液洗涤,即得磁性微球-C1复合物。
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