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龙图腾网恭喜深圳市小分子新药创新中心有限公司申请的专利人工改造脱氨酶辅助的DNA中5-甲基胞嘧啶修饰单碱基分辨率定位分析方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN115418391B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-04-29发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202210955203.0，技术领域涉及：C12Q1/6806；该发明授权人工改造脱氨酶辅助的DNA中5-甲基胞嘧啶修饰单碱基分辨率定位分析方法是由袁必锋;王敏;谢能彬设计研发完成，并于2022-08-10向国家知识产权局提交的专利申请。

本人工改造脱氨酶辅助的DNA中5-甲基胞嘧啶修饰单碱基分辨率定位分析方法在说明书摘要公布了：本发明公开了一种人工改造脱氨酶辅助的DNA中5‑甲基胞嘧啶修饰单碱基分辨率定位分析方法。本发明利用人工改造的胞嘧啶脱氨酶eA3C‑1蛋白对DNA中不同序列特征的胞嘧啶可以实现有效的脱氨基，而其对不同序列特征的5‑甲基胞嘧啶不脱氨基的策略，随后进行聚合酶链式反应扩增进而测序获得5‑甲基胞嘧啶的位点信息。该方法灵敏度高、选择性高、操作简便，不涉及亚硫酸氢盐处理且无需其他生物酶介导，可以直接获得DNA中5‑甲基胞嘧啶的单碱基分辨率定位。

本发明授权人工改造脱氨酶辅助的DNA中5-甲基胞嘧啶修饰单碱基分辨率定位分析方法在权利要求书中公布了：1.一种用于非疾病诊断目的的人工改造脱氨酶辅助的DNA中5-甲基胞嘧啶修饰单碱基分辨率定位分析方法，其特征在于：包含如下步骤：S1：wtA3C和eA3C-1蛋白的表达及纯化；所述wtA3C蛋白的氨基酸序列为NCBIGeneID:27350；所述eA3C-1蛋白的氨基酸序列与wtA3C相比仅有1处不同，即从188位亲水氨基酸丝氨酸更改为疏水氨基酸异亮氨酸；S2：对待检DNA进行变性及脱氨基处理：先对DNA进行变性处理使其形成单链，随后用人工改造的脱氨酶eA3C-1对单链DNA进行脱氨基处理，再将反应体系中的脱氨基酶进行高温灭活处理，具体步骤为：S2.1DNA变性处理是将DNA在95℃高温下孵育10分钟后立即转入冰浴5分钟使双链DNA变性成单链DNA；S2.2所使用的脱氨基反应缓冲液中各成分的终浓度为20mM的4-羟乙基哌嗪乙磺酸，pH为5.5；S2.3脱氨基蛋白的用量需要根据实验过程中表达的脱氨酶蛋白的具体活性进行调整，以保证脱氨基蛋白的用量可以使反应体系中DNA上的胞嘧啶充分脱氨基；脱氨基反应温度为37℃，反应时间为4小时；S2.4脱氨酶的高温灭活处理是在脱氨基反应结束后对反应体系进行90℃，10分钟的孵育，待反应温度冷却至室温可进行下一步操作；S3：扩增脱氨后的DNA片段：取上述40ng脱氨基样品进行聚合酶链式反应，对脱氨基的DNA片段进行扩增；S4：特定序列的DNA片段，经扩增后可以直接进行Sanger测序；经eA3C-1处理的待检DNA中的不同基序的C位点在测序中被读为T，而5mC位点在测序中被读为C。

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