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龙图腾网恭喜重庆医科大学申请的专利一种基于滚环扩增反应的非诊断性肿瘤细胞检测方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN114509568B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-03-14发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202210252596.9，技术领域涉及：G01N33/574；该发明授权一种基于滚环扩增反应的非诊断性肿瘤细胞检测方法是由刘秋云;望芳鸣;黎刚设计研发完成，并于2022-03-09向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种基于滚环扩增反应的非诊断性肿瘤细胞检测方法在说明书摘要公布了：本发明公开了一种基于滚环扩增反应的非诊断性肿瘤细胞检测方法，属于生化检测和分子诊断领域，其技术方案要点是，步骤如下：S1、选出特异性结合MUC1的适配体S2.2，并设计与适配体S2.2部分互补的核酸链CDNA；S2、使适配体S2.2和CDNA形成双链Ⅰ；S3、获得MCF‑7细胞样品；S4、向MCF‑7细胞样品中加入双链Ⅰ、锁式探针、T4DNA连接酶缓冲液和T4DNA连接酶，反应完成后灭活酶，获得反应产物Ⅱ；S5、向反应产物Ⅱ加入Phi29DNA聚合酶、dNTPs、BSA和Phi29DNA聚合酶缓冲液，反应结束后得到串联重复的G四链体单链；S6、在产物Ⅲ中加入荧光染料Tb3+。本发明主要用于将靶细胞的数量信号转化为滚环扩增反应扩增出的大量串联重复G四链体敏化的Tb3+信号，本方法灵敏度高。

本发明授权一种基于滚环扩增反应的非诊断性肿瘤细胞检测方法在权利要求书中公布了：1.一种基于滚环扩增反应的非诊断性肿瘤细胞检测方法，其特征是，步骤如下：S1、筛选出特异性结合MUC1的适配体S2.2，并设计与所述适配体S2.2部分互补的核酸链CDNA，所述适配体S2.2的核酸序列为GCAGTTGATCCTTTGGATACCCTGG；S2、向所述适配体S2.2中加入等量的CDNA得到混合液，然后将混合液加热到95℃保持5min后梯度降温，使所述适配体S2.2和CDNA形成双链Ⅰ，所述CDNA的核酸序列为ATCCAAAGGATCAACTGC；S3、用无酶消化液消化培养后的MCF-7细胞，然后用结合缓冲液重悬所述MCF-7细胞并进行计数，得到MCF-7细胞样品；S4、向所述MCF-7细胞样品中加入双链Ⅰ，37℃反应1h，反应结束后得到反应产物Ⅰ；然后向反应产物Ⅰ中加入锁式探针和T4DNA连接酶缓冲液，再向其中加入T4DNA连接酶，并在16℃环境下反应16h，反应完成后，升温至65℃保持10min灭活酶，使锁式探针的5’端和3’端连接形成环状DNA，获得反应产物Ⅱ，所述锁式探针的核酸序列为Phosphorylation-CCTTTGGATTTTTTCTCCCCCTCCCCCTCCCCCTTTTTGCAGTTGAT；S5、向反应产物Ⅱ加入Phi29DNA聚合酶、dNTPs、BSA和Phi29DNA聚合酶缓冲液，并在37℃环境下反应1h，然后升温至65℃保持10min灭活酶，反应结束后得到产物Ⅲ，即串联重复的G四链体单链；S6、在所述产物Ⅲ中加入荧光染料Tb3+，然后用荧光分光光度计检测荧光，Ex＝290nm，Em＝450nm-560nm，狭缝为5nm。

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