买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！

摘要：本发明公开了基于多价适配体和CHA扩增的比色‑荧光双信号检测沙门氏菌的方法，特点是包括将单链S1、单链S2、单链S3、单链S4、沙门氏菌适配体和cDNA混合制备得到多价适配体竞争性探针溶液的步骤；将发夹探针H1和发夹探针H2分别溶解在PBS缓冲液的步骤；将待测沙门氏菌溶液与多价适配体竞争性探针混合，孵育1小时后，加入发夹探针H1和发夹探针H2进行CHA扩增反应，然后加入血红素溶液、H2O2溶液和ABTS2‑溶液进行过氧化物酶催化反应，分别进行比色法和荧光法的检测，计算得到待测溶液中沙门氏菌浓度的步骤，优点是简便快速、灵敏度高、特异性强且准确性高。

主权项：1.一种基于多价适配体和CHA扩增的比色-荧光双信号检测沙门氏菌的方法，本方法不以诊断或治疗为目的，其特征在于包括以下步骤：步骤1、适配体竞争性探针的合成：将25µM的单链S1溶液、25µM的单链S2溶液、25µM的单链S3溶液、25µM的单链S4溶液、10µM的沙门氏菌适配体溶液、10µM的cDNA溶液和TM缓冲液按体积比1:1:1:1:10:10:26的比例混合后退火处理，得到多价适配体竞争性探针溶液；其中所述的单链S1的核苷酸序列为SEQIDNO.1所示：5'-TCGATGACCCACTCTCACTTACACTTCCTACAGTCTGAAACATCTACAGCTCTGCTACACGAGAGATGCACGCACATAGTA-3'；所述的单链S2的核苷酸序列为SEQIDNO.2所示：5'-TCGATGACCCACTCTCACTTTATCACCAGGTCAGTCTGACAGTGTAGCAGAGCTGTAGATAGATGCTGAGGAGTCCAATAC-3'；所述的单链S3的核苷酸序列为SEQIDNO.3所示：5'-TCGATGACCCACTCTCACTTTCAGACTGACCTGGTGATAAAACGACACTGACGTGGTGAATCTACTATGTGCGTGCATCTC-3'；所述的单链S4的核苷酸序列为SEQIDNO.4所示：5'-TCGATGACCCACTCTCACTTTTCAGACTGTAGGAAGTGTGCTTCACCACGTCAGTGTCGTTTGTATTGGACTCCTCAGCAT-3'；所述的沙门氏菌适配体的核苷酸序列为SEQIDNO.5所示：5'-GTGAGAGTGGGTCATCGAAAAAACTCCTCTGACTGTAACCACGGTGGTTTGATCACTATTGGGCCTTTCTGATGTCGGTAGT-3'；所述的cDNA的核苷酸序列为SEQIDNO.6所示：5'-CAAACCACCGTGGTTACAGT-3'；步骤2、发夹探针的制备：将发夹探针H1溶解在PBS缓冲液后进行退火处理，得到浓度为1.5μM的H1溶液；将发夹探针H2溶解在PBS缓冲液后进行退火处理，得到浓度为1μM的H2溶液，其中所述的发夹探针H1的核苷酸序列为SEQIDNO.7所示：5'-FAM-ACCGTGGTTACAGTGGGTGGGTGGGGTCGACTGTAACCACGGTGGTT-BHQ-3'，所述的发夹探针H2的核苷酸序列为SEQIDNO.8所示：5'-TGGGTGGGTGGGTGGGTCGAACCACCGTGGTTACAGTCGACCCCACCCACCCACTGT-3'；步骤3、荧光法检测沙门氏菌：取待测样品加入步骤1制备得到的多价适配体竞争性探针溶液中，在室温下孵育1小时，然后加入步骤2制备得到的1.5μM的H1溶液和1μM的H2溶液，在室温下孵育30分钟进行CHA反应，得到CHA反应产物，用酶标仪在510nm至550nm的波长范围内记录产生的荧光信号，根据荧光强度与沙门氏菌浓度之间的定量关系，计算获得待测样品中沙门氏菌的浓度；步骤4、比色法检测沙门氏菌：在步骤3得到的CHA反应产物中继续加入0.1mM的血红素溶液、50mM的H2O2溶液和50μM的ABTS2-溶液进行过氧化物酶催化反应，用酶标仪在450nm处测量吸光度，根据吸光度值与沙门氏菌浓度之间的定量关系，计算获得待测样品中沙门氏菌的浓度。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 宁波大学 基于多价适配体和CHA扩增的比色-荧光双信号检测沙门氏菌的方法