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摘要:本发明属于生物医药技术领域,具体涉及一种表达Siglec‑10基团的M1型巨噬细胞外泌体构建的肿瘤治疗体系。本发明利用生物合成S10基团表达入巨噬细胞外泌体及化学合成PD‑L1抗体连接于巨噬细胞外泌体的方法构建得到一种S10MExo‑aP协同治疗体系。一方面,携带的Siglec‑10基团可以阻断肿瘤CD24蛋白与巨噬细胞上的Siglec‑10蛋白通路,激活巨噬细胞清除肿瘤细胞,促进抗原提呈作用,进而抑制肿瘤生长;另一方面,连接的PD‑L1抗体可以调控肿瘤微环境,降低肿瘤免疫抑制,各组分协同免疫杀伤肿瘤,从而协同实现高效肿瘤免疫治疗效果,具有广阔的应用前景。
主权项:1.一种高表达Siglec-10基团且连接PD-L1抗体的双嵌合巨噬细胞外泌体的治疗体系S10MExo-aP的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:S1、往含RAW264.7细胞的悬液中加入携带Siglec-10基因的慢病毒颗粒,放置在37℃、5%的CO2孵箱中培养5-7天后获得表达Siglec-10基团的RAW264.7巨噬细胞;S2、通过离心法收集表达Siglec-10基团的RAW264.7巨噬细胞的上清,上清经超速离心收集沉淀后获得嵌合Siglec-10基团的RAW264.7巨噬细胞外泌体S10Mexo;S3、合成一端为活性羧基,另一端为6-马来酰亚胺的MMP酶敏感肽段RVGLP,再通过该肽段的活性羧基NHS与PD-L1抗体的氨基作用,将肽段连接到PD-L1抗体,获得aP-RVGLP;S4、将三2-羧乙基膦与S10MExo共孵育,利用TECP使S10MExo表面膜蛋白的二硫键打开,暴露巯基,然后将暴露巯基的S10MExo与aP-RVGLP共孵育,使S10MExo表面暴露的巯基与aP-RVGLP的6-Mal端连接,构建出双嵌合的S10MExo-aP体系。
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百度查询: 中山大学·深圳 中山大学 一种表达Siglec-10基团的M1型巨噬细胞外泌体构建的肿瘤治疗体系
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