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申请/专利权人：重庆医科大学
摘要：本发明公开了一种免洗的蛋白标志物免疫PCR检测方法，属于蛋白质分子检测技术领域，设计一种桥梁探针Sprobe，其可以与发生变构的双链适体探针apt‑Aprobe中的输入探针Aprobe的3’杂交互补；所述双链适体探针被设计为3’封闭的结构，apt链作为封闭链封闭Aprobe，形成apt‑Aprobe，当其与蛋白靶标结合后会发生变构，使输入探针Aprobe与apt链分离并暴露出3’的区域，从而为桥梁探针Sprobe提供互补区域；当输入探针Aprobe和桥梁探针Sprobe发生互补后，T4DNA聚合酶发挥其5’→3’的聚合酶活性，将输入探针Aprobe和桥梁探针Sprobe延伸形成稳定的双链体。本发明引入具有聚合及剪切作用的T4DNA聚合酶，其可以聚合与输入探针杂交的桥梁探针，水解掉游离的桥梁探针，从而无需洗涤即可实现阳性和阴性的区分。
主权项：1.一种免洗的蛋白标志物免疫PCR检测方法，其特征在于，设计一种桥梁探针Sprobe，其可以与发生变构的双链适体探针apt-Aprobe中的输入探针Aprobe的3’杂交互补；所述双链适体探针被设计为3’封闭的结构，apt链作为封闭链封闭Aprobe，形成apt-Aprobe，当其与蛋白靶标结合后会发生变构，使输入探针Aprobe与apt链分离并暴露出3’的区域，从而为桥梁探针Sprobe提供互补区域；当输入探针Aprobe和桥梁探针Sprobe发生互补后，T4DNA聚合酶发挥其5’→3’的聚合酶活性，将输入探针Aprobe和桥梁探针Sprobe延伸形成稳定的双链体；当不存在蛋白靶标时，游离的桥梁探针Sprobe被T4DNA聚合酶的外切酶活性剪切，不会产生荧光信号；具体检测步骤为：步骤一：将双链适体探针apt-Aprobe与蛋白在室温摇床上孵育，使得适体apt充分与蛋白结合；步骤二：加入桥梁探针Sprobe和T4DNA聚合酶，进行聚合剪切反应；步骤三：接着对步骤二的反应产物进行PCR扩增；在PCR扩增体系中加入荧光染料，通过监测荧光信号的变化来实时监测PCR反应中DNA的扩增情况。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 重庆医科大学 一种免洗的蛋白标志物免疫PCR检测方法
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