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申请/专利权人：上海藻翰生物科技有限公司

摘要：本发明涉及一种高产甘油葡萄糖苷的微藻的制备方法，通过在补料培养基中加入激素类组合物，同时通过对藻细胞进行梯度的盐、二氧化碳和激素胁迫，实现甘油葡萄糖苷的快速积累，从而获得高产甘油葡萄糖苷的微藻细胞。

主权项：1.一种高产甘油葡萄糖苷的微藻的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：（1藻细胞增殖阶段，采用通气光照培养与补料结合的方式培养藻细胞；（2甘油葡萄糖苷生成阶段，当细胞量达到最高点，调整补料配方为胁迫培养基，并根据胁迫培养的天数不断调整胁迫条件；其中，所述微藻为螺旋藻；其中，藻细胞增殖阶段先将藻细胞接种到初始培养基中，培养过程中提供光照和补料，所述初始培养基包含碳源、氮源及微量元素；所述碳源为NaHCO3，氮源为NaNO3；所述初始培养基包括NaHCO35-20克升、K2HPO40.1-1.5克升、NaNO31-5克升、NaCl0.5-2克升、MgSO4·7H2O0.1-1克升、FeSO4·7H2O0.005-0.02克升、K2SO40.5-2克升、CaCl·2H2O0.02-0.1克升、EDTA0.02-0.1克升、H3BO31-3毫克升、NH46MO7O240.01-0.03毫克升、MnCl·4H2O0.5-3毫克升、CuSO4·5H2O0.05-0.2毫克升、ZnSO4·7H2O0.1-0.3毫克升、NH4VO310-30毫克升、NiSO3·7H2O20-60毫克升、NaWO45-30毫克升、TiSO4220-80毫克升、CONO32·6H2O2-8毫克升；所述光照初始为1000-10000lux，后根据细胞量逐级增强光照，最高至30000lux；在光生物反应器中的初始通气量为0.2VVM，所通入的气体为含有二氧化碳的混合空气，二氧化碳浓度为0.1％-2％（v／v，随后根据细胞量逐级增加二氧化碳浓度，最高为5％（v／v；所述补料配方为６－苄氨基嘌呤（６－ＢＡ0.01-0.5mg／mL、赤霉素（GA0.1-2mgmL、Ａ－萘乙酸（ＮＡＡ0.1-1mgmL、二氯苯氧乙酸（2,4-D0.1-1mgmL、噻唑蓝MTT0.0001-0.002mgmL、３－吲哚乙酸（ＩＡＡ0.4-2mgmL，其中，第1-3天使用前3种，随后使用全部的激素种类；所述胁迫培养基如下：（1激素类物质：GA0.1-0.5mg／mL、NAA1-2mg／mL、6-BA1-2mg／mL、2,4-D0.3-0.8mgmL、IAA0.5-1.5mgmL、MTT0.0005-0.0015mgmL；2无机盐配方为：NaHCO310-20克升、K2HPO40.2-0.8克升、NaNO31-4克升、MgSO4·7H2O0.02-0.5克升、FeSO4·7H2O0.001-0.02克升、K2SO40.5-1.5克升、CaCl·2H2O0.01-0.07克升；3盐胁迫配方为：NaCl5%-15%，4次氯酸钠配方为：0.01%-0.1%；所述步骤（1）培养时间为7天，步骤（2）培养时间为10天；所述氯化钠从0逐级升到1000mmol／L，每天上升100mmol／L，所述次氯酸钠每隔一天控制在0.002ppm。

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百度查询： 上海藻翰生物科技有限公司 一种采用连续流加梯度补料高产甘油葡萄糖苷的方法