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申请/专利权人:山东大学;青岛易邦生物工程有限公司
摘要:本发明涉及一种伪狂犬病毒BarthaK61疫苗株基因组分段克隆和拯救的反向遗传操作系统及其构建方法与应用。该系统包括:含有伪狂犬病毒BarthaK61疫苗株全基因组的重组质粒BAC‑cm‑PRV‑EA、BAC‑cm‑PRV‑BC和BAC‑cm‑PRV‑FG,以及表达伪狂犬病毒BarthaK61疫苗株全基因组的宿主细胞。本发明伪狂犬病毒BarthaK61疫苗株的反向遗传操作系统,通过ExoCET克隆与组装技术将BarthaK61基因组成功拆分为6段,再组装成3个重组质粒BAC‑cm‑PRV‑EA、BAC‑cm‑PRV‑BC和BAC‑cm‑PRV‑FG,这三个重组质粒经PacI线性化后可以共同转染到非洲绿猴肾细胞,拯救BarthaK61病毒,并且所拯救出的BarthaK61病毒感染效力与疫苗株相当。因此该反向遗传操作系统可以为创制猪病防治相关活载体疫苗提供优良载体,用于研制表达相关猪病抗原基因的BarthaK61重组基因工程载体疫苗。
主权项:1.一种伪狂犬病毒BarthaK61疫苗株基因组分段克隆和拯救的反向遗传操作系统,其特征在于,该系统包括:含有伪狂犬病毒BarthaK61疫苗株全基因组的重组质粒BAC-cm-PRV-EA、BAC-cm-PRV-BC和BAC-cm-PRV-FG,以及表达伪狂犬病毒BarthaK61疫苗株全基因组的宿主细胞。
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