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申请/专利权人：苏州先觉新材料科技有限公司

摘要：本发明涉及生物材料技术领域，公开了一种细胞外基质水凝胶微球及其制备方法，制备方法包括：构建新生大鼠骨髓间充质干细胞来源的细胞外基质；通过微流控技术制备水凝胶微球；利用缩合剂DMTMM活化水凝胶微球表面的羧基并将活化后的水凝胶微球与细胞外基质上的氨基反应制备得到细胞外基质水凝胶微球。本发明构建了一种细胞外基质水凝胶微球，实现了与干细胞衍生细胞外基质的优势互补，在保证水凝胶前体材料生物相容性的同时，又同样具备机械性能。加上细胞外基质的结合，可以显著促进骨髓间充质干细胞的体外成骨，并且抑制破骨细胞的分化，为颅骨缺损修复提供了更多的可能性。

主权项：1.一种细胞外基质水凝胶微球的制备方法，其特征在于，包括：构建新生大鼠骨髓间充质干细胞来源的细胞外基质；通过微流控技术制备水凝胶微球，微流控技术中采用含光引发剂的去离子水配置水凝胶前体溶液作为水相，水凝胶前体溶液包括透明质酸甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酰化明胶、甲基丙烯酰化丝素蛋白和甲基丙烯酰化胶原蛋白中的一种或多种；透明质酸甲基丙烯酸酯溶液浓度1%-5%，甲基丙烯酰化明胶溶液浓度5%-20%，甲基丙烯酰化丝素蛋白溶液浓度为7.5%-20%，甲基丙烯酰化胶原蛋白溶液浓度为1%-20%；利用缩合剂DMTMM活化水凝胶微球表面的羧基并将活化后的水凝胶微球与细胞外基质上的氨基反应制备得到细胞外基质水凝胶微球;利用缩合剂DMTMM活化水凝胶微球表面的羧基并将活化后的水凝胶微球与细胞外基质上的氨基反应，具体包括以下步骤：步骤S1、将水凝胶微球浸泡于DMTMM溶液中，室温离心搅拌离心，以及将所述细胞外基质进行冻干处理，并将冻干好的细胞外基质充分研磨，通过无菌去离子水溶解，得到细胞外基质悬浊液；步骤S2、将水凝胶微球加入细胞外基质悬浊液中，摇床上反应;构建新生大鼠骨髓间充质干细胞来源的细胞外基质具体包括以下步骤：步骤S11、将新生大鼠来源的骨髓间充质干细胞接种至细胞培养皿中，使用完全培养基培养直至细胞密度达到90%；步骤S12、向完全培养基中加入浓度为80-200μM的抗坏血酸，持续3-10d;步骤S13、弃去旧培养基，加入脱细胞液进行孵育；步骤S14、去除脱细胞液，加入脱氧核糖核酸酶继续孵育；步骤S15、弃去脱氧核糖核酸酶，通过PBS缓冲液清洗；步骤S16、使用细胞刮刀收集细胞外基质。

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