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申请/专利权人：北京同立海源生物科技有限公司
摘要：本发明公开了一种基于hiPS细胞的Vitronectin生物学活性检测方法，涉及重组蛋白活性检测技术领域。本发明检测方法解决了现有方法仅可定性不可定量检测的难题，实现了对VitronectinVTN蛋白活性的定量检测，并且操作简单，周期较短，方法稳定性较好，可同时快速进行多批次VTN的活性检测。
主权项：1.一种基于hiPS细胞的Vitronectin生物学活性检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1包被Vitronectin蛋白：用1×DPBS将待测VTN蛋白稀释至不同浓度作为包被液，每孔加入100μL，每个浓度包被3孔，37℃包被1～2h或2～8℃包被12～20h；2准备细胞：收集对数期的hiPS-B1细胞，按照细胞铺板密度为2.5E4cm2，计算96孔板每孔细胞数为0.8E4个细胞，根据样品数计算此次实验所需细胞总数N；根据细胞计数中活细胞密度，计算取N个hiPS-B1细胞，需要的对数期的hiPS细胞的体积，并用1×DPBS离心清洗细胞一次；按照每孔加入细胞体积为100μL，计算重悬细胞沉淀所需细胞维持液体积V；将离心后的细胞沉淀，用V体积的细胞维持液重悬，并加入Y-27632，使Y-27632终浓度为10μmolL，混匀待用，此为细胞终悬液；3细胞铺板：将步骤1包被好VTN蛋白的96孔细胞培养板取出，吸弃包被液；步骤2中用V体积重悬的细胞，按每孔100μL加入包被好VTN蛋白的96孔细胞培养板孔中，将细胞轻轻拍散，置于37℃，5％CO2培养箱中培养19-21h；4检测及数据处理：采用CCK-8法对每孔进行检测，读取OD450值：吸弃孔中培养基，并每孔加入100μLDMEMF12培养基清洗两次；每孔加入100μLDMEMF12培养基和10μlCCK-8试剂，37℃，5％CO2培养箱中孵育4h后，于酶标仪读取OD450值；采用GraphPad软件进行数据处理，以x轴为不同浓度VTN的值，y轴为OD450值，采用四参数拟合S型曲线，得到ED50。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 北京同立海源生物科技有限公司 一种基于hiPS细胞的Vitronectin生物学活性检测方法
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