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用于改善使用亲和色谱法分离异源二聚体蛋白与杂质的方法 

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申请/专利权人:瑞泽恩制药公司

摘要:公开了通过一系列色谱循环从杂质中纯化异源二聚体蛋白例如,双特异性抗体的方法在多个实施方案中,使所述洗脱缓冲液的pH随着所述系列中的循环的增加而增加,以维持结合杂质的污染最小,并且异源二聚体蛋白的回收率不发生显著损失。

主权项:1.一种纯化异源二聚体蛋白的方法,所述方法包括:a进行一系列色谱循环,其中每个循环包括:i将异源二聚体蛋白和杂质的混合物引入含有蛋白质结合配体的亲和基质中,其中所述异源二聚体蛋白包含对所述蛋白质结合配体具有不同亲和力的第一多肽和第二多肽,并且其中至少一种杂质结合所述蛋白质结合配体,并且至少一种杂质不结合所述蛋白质结合配体;ii在5至9的第一pH下用第一洗涤缓冲液来洗涤所述亲和基质,以除去非结合杂质;iii在第二pH下在第一洗脱缓冲液中从所述亲和基质洗脱所述异源二聚体蛋白;以及iv在小于4的第三pH下用第二洗涤缓冲液洗涤所述亲和基质,以除去结合杂质;其中所述第二pH在所述一系列色谱循环中的初步一系列循环期间处于初步pH,并且在所述一系列色谱循环中的后续一系列循环期间,所述第二pH升高至高于所述初步pH的后续pH,其中所述初步pH和所述后续pH在4.0至5.2的范围内;以及b在洗脱液中从所述亲和基质收集所述异源二聚体蛋白。

全文数据:

权利要求:

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