买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！

申请/专利权人：海南大学

摘要：本发明提供了一种快速筛选鸡矢藤中降尿酸物质的方法及应用，方法包括：将鸡矢藤提取物与XO孵育后，生物亲和超滤将配体‑受体复合物与未结合的复合物分离，随后通过UPLC‑ESI‑QTrap‑MSMS和HPLC‑DAD方法分析识别和量化配体‑受体复合物释放的配体化合物。该筛选过程只需借助合适孔径的滤膜完成，无固定化，实验步骤简单，实验条件温和，可控制受体和配体的孵育温度，实现了高通量、高效筛选。此外，分子对接分析揭示了筛选出的潜在XO抑制剂与XO相互作用的活性机制，为制备降尿酸的天然药物或保健品提供了理论和技术支持，有利于鸡矢藤的进一步开发利用，具有极大的应用前景。

主权项：1.一种快速筛选鸡矢藤中降尿酸物质的方法，包括：将鸡矢藤提取物与XO孵育后，生物亲和超滤将配体-受体复合物与未结合的复合物分离，随后通过UPLC-ESI-QTrap-MSMS和HPLC-DAD方法分析识别和量化配体-受体复合物释放的配体化合物；所述鸡矢藤提取物采用以下方法制备：将鸡矢藤粉末用60%乙醇按固液比为1：30超声提取，分离得到上清液，上清液用旋转蒸发器除去乙醇，浓缩的鸡矢藤提取物通过AB-8大孔树脂转移到柱上，静置过夜后，用去离子水洗脱柱，去除大分子杂质，然后用95%乙醇解吸AB-8大孔树脂吸附的黄酮类化合物，收集洗脱液并除去乙醇，将得到的浓缩物冷冻干燥，用于后续实验；将浓度为0.5mgmL的鸡矢藤提取物样品与5UmL的XO按照体积比1：1依次加入到分子量为30kDa的超滤管中，在37℃下孵育10min，12000rpm离心10min，随后加入PBS洗去除未结合的化合物，重复3~5次，再加入甲醇从复合物中分离出XO特异性结合配体；提取液中的主要化合物使用AcquityUPLCHSST3柱进行分离，分别采用0.1%甲酸-水作为流动相A、乙腈作为流动相B，梯度洗脱方法如下：0~0.5min，2%B，0.5min~10min，2~50%B，10min~13min，50~95%B，13min~15min，95~2%B；柱培养箱温度为40℃，注射体积为2μL，流速为0.4mLmin；ESI-MSMS的相关仪器设置如下：离子源的相关参数设置如下：离子喷雾电压+5500-4500V，气流35psi，温度400℃，离子源气体1：60psi，离子源气体2：60psi，dp：±100V；HPLC-DAD方法中，分别采用0.1%甲酸-水作为流动相A、乙腈作为流动相B，洗脱梯度为0~5min15%B；5min~10min，15~20%B；10min~20min，20~25%B；20min~40min25~50%B；40min~55min50~80%B；55min~60min80~10%B，进样量为10μL，流速为0.8mLmin，结果以μggDW表示；根据标准保留时间、前驱体离子质量电荷比、产物离子质量电荷比和离子模式与植物数据自建文库的进行比较，一共检测出15种黄酮类物质，化合物1-15依次鉴定为表没食子儿茶素，飞燕草素-3-O-葡萄糖苷，原儿茶醛，表没食子儿茶素没食子酸酯，表儿茶素，二氢杨梅素，芦丁，异牡荆素，山奈酚-3-O-芸香糖苷，木犀草苷，山奈酚-3-O-洋槐糖苷，紫云英苷，槲皮苷，扁蓄苷，杨梅素；其中，表没食子儿茶素、原儿茶醛、二氢杨梅素、山奈酚-3-O-芸香糖苷、木犀草苷、山奈酚-3-O-洋槐糖苷、紫云英苷和槲皮苷为XO抑制剂。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 海南大学 一种快速筛选鸡矢藤中降尿酸物质的方法及应用