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用于产生视网膜色素上皮细胞的方法和组合物 

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申请/专利权人:拜奥拉米那公司

摘要:方法包括提供贴附在包含第一层粘连蛋白的第一基质上的人多能干细胞的培养物;将干细胞暴露于分化培养基中15天至50天的第一时间段,以获得包含RPE细胞和或其祖代的第一贴壁细胞群体;在第一时间段结束时,将第一群体与第一基质解离;将解离的第一细胞群体重新铺板在包含第二层粘连蛋白的第二基质上;以及在第二基质上培养重新铺板的第一细胞群体第二时间段,以获得包含RPE细胞的扩增和成熟的第二细胞群体。第一和第二层粘连蛋白可以独立地选自LN‑521、LN‑511、LN‑111和LN‑121,并且是完整的蛋白质或蛋白质片段。可用于体外生成RPE细胞的细胞表面标志物选自CD140b、CD56、CD104、CD164、CD220、EGFR、GD2、CD184、CD10、CD30、CD49a、CD49b、CD50、CD171、TRA‑1‑60和CD326,优选地CD140b、CD56、GD2和或CD184。还包括如此产生的RPE细胞以及利用此类RPE细胞进行各种治疗的材料和组合物。

主权项:1.用于获得视网膜色素上皮RPE细胞的方法,所述方法包括:a.提供贴附在包含第一层粘连蛋白的第一基质上的人多能干细胞的培养物;b.将所述干细胞暴露于分化培养基中15天至50天的第一时间段,以获得包含RPE细胞和或其祖代的第一贴壁细胞群体;c.在所述第一时间段结束时,将第一细胞群体与所述第一基质解离;d.将解离的第一细胞群体重新铺板在包含第二层粘连蛋白的第二基质上;以及e.在所述第二基质上培养重新铺板的第一细胞群体第二时间段,以获得包含所述RPE细胞的扩增和成熟的第二细胞群体;其中所述第一和第二层粘连蛋白独立地选自LN-521、LN-511、LN-111和LN-121,并且是完整的蛋白质或蛋白质片段;其中所述方法包括定量表达CD140b的标志物的细胞的数量或分数;和其中当所述细胞的至少30%对所述标志物呈阳性时,开始所述解离步骤c,和或继续所述培养步骤e,直到所述细胞的至少80%对所述标志物呈阳性。

全文数据:

权利要求:

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