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苯乙烯单加氧酶突变体及其应用 

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申请/专利权人:天津凯莱英生物科技有限公司;凯莱英医药集团(天津)股份有限公司

摘要:本发明提供了一种苯乙烯单加氧酶突变体及其应用。该苯乙烯单加氧酶突变体包括:(a)具有SEQIDNO:1所示的氨基酸序列的蛋白质;(b)在(a)中的上述氨基酸序列的如下至少一个位点:I206、S107、P54、N307、S178、L310、L275、L204、W86、E202、H392或E221,经过氨基酸突变且具有苯乙烯单加氧酶功能的蛋白质;或(c)与(a)或(b)中任一项限定的氨基酸序列具有80%以上同源性且具有苯乙烯单加氧酶功能的蛋白质。能够解决现有技术中的苯乙烯单加氧酶活性低的问题,具有活性高和或底物选择范围大等优良性能,经济价值高,应用前景广,适用于酶催化领域。

主权项:1.一种苯乙烯单加氧酶突变体,其特征在于,所述苯乙烯单加氧酶突变体为SEQIDNO:1所示的氨基酸序列的如下至少一个位点:I206、S107、P54、N307、S178、L310、L275、L204、W86、E202、H392、E221、R53、V83、A101、A102、R157、F180、I194、L218、A232、G273、Q277、Q313、V388或A52,经过氨基酸突变且具有苯乙烯单加氧酶功能的蛋白质;其中,所述苯乙烯单加氧酶突变体的突变选自如下任意一种氨基酸突变:I206V、I206Q、I206P、I206V+S107A、I206V+S107E、I206V+S107K、I206V+R157W、I206V+I194F、I206V+I194D、I206V+I194W、I206V+P54L、I206V+P54S、I206V+P54F、I206V+R157Y、I206V+R157F、I206V+N307C、I206V+N307W、I206V+N307Y、I206V+N307D、I206V+L275F、I206V+L275A、I206V+L275T、I206V+S178F、I206V+S178N、I206V+S178W、I206V+R53N、I206V+R53G、I206V+R53H、I206V+F180Y、I206V+F180E、I206V+F180S、I206V+A52N、I206V+A52Q、I206V+A52F、I206V+A52H、I206V+A52P、I206V+G273S、I206V+G273A、I206V+G273H、I206V+G273F、I206V+S107A+P54L、I206V+S107A+P54S、I206V+S107A+G273A、I206V+S107A+G273F、I206V+S107A+A52P、I206V+S107A+F180S、I206V+S107A+R53N、I206V+S107A+L275T、I206V+S107A+N307Y、I206V+S107A+R157F、I206V+S107A+I194D、I206V+S107A+P54L+N307C、I206V+S107A+P54L+N307W、I206V+S107A+P54L+L275A、I206V+S107A+P54L+L275F、I206V+S107A+P54L+I194W、I206V+S107A+P54L+R157F、I206V+S107A+P54L+I194D、I206V+S107A+P54L+L275T、I206V+S107A+P54L+A52P、I206V+S107A+P54L+R53H、I206V+S107A+P54L+N307D、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F、I206V+S107A+P54L+N307C+S178C、I206V+S107A+P54L+N307C+S178I、I206V+S107A+P54L+N307C+R53N、I206V+S107A+P54L+N307C+F180Y、I206V+S107A+P54L+N307C+F180I、I206V+S107A+P54L+N307C+A52N、I206V+S107A+P54L+N307C+A52S、I206V+S107A+P54L+N307C+G273S、I206V+S107A+P54L+N307C+G273A、I206V+S107A+P54L+N307C+G273H、I206V+S107A+P54L+N307C+I194F、I206V+S107A+P54L+N307C+I194H、I206V+S107A+P54L+N307C+I194D、I206V+S107A+P54L+N307C+I194W、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310I、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310A、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310H、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310R、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310Q、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310M、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310V、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310C、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310F、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+Q313M、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+Q313A、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+Q313P、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+Q313K、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+Q313S、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L275Y、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L275A、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L275G、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L275H、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L275E、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310S、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310I+L275Y、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310I+L275Q、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310I+L275M、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310I+L275A、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310I+L275S、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310I+A232Y、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310I+A232G、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310I+A232S、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310I+A232Q、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310I+A232V、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310I+A232C、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310I+A232M、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310I+V388A、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310I+V388F、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310M+L275Y、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310S+L275Y、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310C+L275Y、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310F+L275Y、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310A+L275Y、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310M+L275Y+L204C、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310M+L275Y+L204A、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310M+L275Y+L204S、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310M+L275Y+L204F、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310M+L275Y+W86F、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310M+L275Y+W86Q、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310M+L275Y+W86A、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310M+L275Y+W86S、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310M+L275Y+W86K、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310M+L275Y+W86G、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310M+L275Y+L204C+W86F、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310M+L275Y+L204C+W86A、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310M+L275Y+L204C+W86Q、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310M+L275Y+L204C+W86G、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310M+L275Y+L204C+W86H、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310M+L275Y+L204C+W86Y、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310M+L275Y+L204C+W86M、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310M+L275Y+L204C+L218Q、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310M+L275Y+L204C+L218I、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310M+L275Y+L204C+L218S、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310M+L275Y+L204C+L218G、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310M+L275Y+L204C+L218W、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310M+L275Y+L204C+L218D、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310M+L275Y+L204C+W86M+L218I、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310M+L275Y+L204C+W86M+L218A、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310M+L275Y+L204C+W86M+L218H、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310M+L275Y+L204C+W86M+L218G、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310M+L275Y+L204C+W86M+L218S、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310M+L275Y+L204C+W86M+L218E、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310M+L275Y+L204C+W86M+E202S、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310M+L275Y+L204C+W86M+E202A、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310M+L275Y+L204C+W86M+E202Q、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310M+L275Y+L204C+W86M+A101S、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310M+L275Y+L204C+W86M+A101R、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310M+L275Y+L204C+W86M+A101G、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310M+L275Y+L204C+W86M+L218I+A101S、I206V+S107A+P54L+N307C+S178F+L310M+L275Y+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