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申请/专利权人：广东工业大学
摘要：本发明公开了一种幽门螺旋杆菌外膜囊泡及其制备方法与应用；旨在提供一种简单、快捷且经济从幽门螺旋杆菌中分离出omv，并将其纯化的方法；其制备的外膜囊泡轮廓清晰，结构完整的幽门螺旋杆菌外膜囊泡；其可以作为幽门螺杆菌外膜囊泡作为制备抑制MC3T3‑E1细胞的成骨分化药物的应用；该方法1）幽门螺杆菌复苏，2）细菌传代；3）幽门螺杆菌的液体培养；4）幽门螺杆菌外膜囊泡的提取；5）幽门螺杆菌外膜囊泡的纯化；属于细胞生物学技术领域。
主权项：1.一种非治疗目的的OMVs抑制MC3T3-E1细胞的成骨分化的应用，其特征在于，所述的OMVs通过下述步骤制备的：1）幽门螺杆菌复苏2）细菌传代取步骤1）复苏后的幽门螺杆菌，灭菌冷却后挑取菌落再次转接在新鲜配制的哥伦比亚血琼脂平板上继续培养3天进行扩增；3）幽门螺杆菌的液体培养取步骤2）扩增后的菌体置于培养基中，培养72h后达到对数生长期，得到幽门螺杆菌细菌悬液；4）OMVs的提取取幽门螺杆菌细菌悬液，离心分离过滤，取滤液；将滤液再次离心分离后弃上清液，加入PBS缓冲液重悬沉淀再次离心，弃上清液，再次加入PBS缓冲液重悬收集沉淀得到外膜囊泡；5）OMVs的纯化步骤4）制备的沉淀采用缓冲液重悬，置于冰上HEPES缓冲液作为稀释液，以每层2mL，总共8层，按照20-45%的体积浓度将密度梯度离心缓冲液从上至下配制成非连续的密度梯度离心装置，制作OpetiPrepTM密度梯度液，在超速离心管内由下往上依次加入2ml45wv%碘克沙醇，2ml42wv%碘克沙醇，2ml39wv%碘克沙醇，2ml36wv%碘克沙醇，2ml32wv%碘克沙醇，2ml28wv%碘克沙醇，2ml24wv%碘克沙醇，2ml20wv%碘克沙醇，并将上一步收集得到的外膜囊泡加在密度梯度离心装置最上层进行离心，离心条件为200,000g，4°C过夜离心；用PBS洗涤沉淀物三次，得到纯化后的OMVs。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 广东工业大学 幽门螺旋杆菌外膜囊泡及其制备方法与应用
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