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申请/专利权人：杭州汉库医学检验所有限公司

摘要：本发明提供血清中7种游离甾体激素质谱检测试剂盒及检测方法，包括样本与试剂包A中的试剂A混合，静置，混合后转移至试剂包C中的超滤离心管内超滤，滤液转移至离心管，加入试剂包B中的内标，涡旋混匀，静置，加入试剂包A中的试剂B，涡旋混匀，静置，高速离心。取上清液，冻干，加入试剂包A中的试剂D，涡旋，衍生，并恢复至室温，冻干，加入试剂包A中的试剂C，涡旋，所制备样本上机分析。应用超高效液相色谱质谱联用系统，在C18反相色谱柱上，实现7种游离甾体激素在色谱柱上的分离，经分离的7种游离甾体激素进入质谱系统检测。本发明提供了一种准确高效的血清中7种游离甾体激素同时检测的质谱检测试剂盒及检测方法。

主权项：1.一种血清中7种游离甾体激素质谱检测方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）血清样本前处理：包括血清样本稀释，超滤，萃取，衍生，所制备的样本作为高效液相色谱质谱分析备用；稀释为：移取试剂HEPPS缓冲溶液与样本加入离心管内，涡旋混匀，恒温静置；超滤为：将该离心管中液体全部转移至超滤离心管中，进行超滤；萃取为：离心结束后，转移滤液至离心管内，加入由各激素内标标准物质混合溶液制备而成的内标，涡旋混匀，室温条件下静置，向上述离心管内加入试剂甲基叔丁基醚，涡旋，静置后离心；衍生为：移取上清液于离心管中冻干，冻干结束后，于离心管内加入试剂盐酸羟胺甲醇溶液，涡旋，衍生，衍生后恢复至室温，冻干，加入试剂30%甲醇水，涡旋；（2）校准品前处理：将所述（1）血清样本前处理中的血清样本更换为相同体积的游离皮质醇、游离皮质酮、游离11-脱氧皮质醇、游离雄烯二酮、游离脱氢表雄酮、游离脱氢表雄酮硫酸酯、游离睾酮的校准品，前处理方法相同于所述（1）血清样本前处理方法，所制备样本作为高效液相色谱质谱分析备用；（3）质控品前处理：将所述（1）血清样本前处理中的血清样本更换为相同体积的质控品，其中质控品包括低质控和高质控，前处理方法同所述（1）血清样本前处理方法，所制备样本作为高效液相色谱质谱分析备用；（4）超高效液相色谱分离：应用超高效液相色谱系统，在AgilentProshell120EC-C183.0×50mm2.7μm的C18反相色谱柱上，在流动相A为0.1%甲酸水溶液，流动相B为0.1%甲酸乙腈溶液组成、流动相梯度：0-1.5min，A：70-55%、B:30-45%；1.5-2.5min，A：55-45%、B:45-55%；2.5-3min，A：45-0%、B:55-100%；3-4min，A：0%、B:100%；4-4.1min，A：0-70%、B:100-30%；4.1-5min，A：70%、B:30%、流速为0.4mLmin、柱温为40℃和进样量为10µL的条件下，实现7种游离甾体激素在C18反相色谱柱上的分离；（5）串联四级杆质谱检测：经分离的7种游离甾体激素进入质谱系统检测，采用毛细管电压500V，锥孔电压30V，脱溶剂温度500℃，脱溶剂气1000LHr，锥孔气150LHr，离子源温度150℃，采用MRM模式，每个化合物两个离子对，分别用于定性和定量，实现7种游离甾体激素的质谱检测。

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