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申请/专利权人：山东水发生命科学研究有限公司
摘要：本发明涉及牙髓组织处理技术领域，特别涉及一种牙髓组织干细胞的分离制备方法及其牙髓组织清洗液。本发明提供的一种牙髓组织干细胞的分离制备方法及其牙髓组织清洗液，通过在分离制备过程中使用牙髓组织清洗液，从而降低了牙髓干细胞分离制备过程染菌的风险，提高了牙髓干细胞的纯度和获得率。
主权项：1.一种牙髓组织干细胞的分离制备方法，包括以下步骤：A、牙齿的采集和保存：临床收集正常的乳牙或恒牙待用；B、消毒清洗：将所述的牙齿用0.02％乙酸氯己定溶液浸泡消毒5-6min，随后将消毒后的牙齿用牙髓组织清洗液进行清洗；C、分离：沿着牙釉质和牙骨质分界处用高速牙科手机环绕牙颈部磨出凹槽，不可穿髓，在超净化工作台中，沿凹槽劈开牙齿，取出牙冠根部的全部牙髓，并切除牙齿根尖部1mm的牙髓，将得到的牙髓用所述的牙髓组织清洗液清洗3-5次，将上述全部牙髓组织剪成1mm3～3mm3大小牙髓块用以进行原代细胞培养；D、消化：将所述的牙髓块移入牙髓干细胞组织消化液中，混匀后37℃消化15min，加入完全培养基终止消化后，离心，弃上清，将沉淀移入已加完全培养基的培养瓶中，于37℃、5％CO2恒温孵育箱内培养，24h后观察到细胞贴壁，每3d换液一次，待细胞爬满瓶底，约3-4d可传代1次，所述的组织消化液含有1:1比例混合的3mgml的Ⅰ型胶原酶及4mgml分散酶；E、细胞传代：细胞融合度达80％～90％时，进行细胞消化，弃掉培养瓶中的上清液，用生理盐水冲洗培养瓶底细胞，用0.25％TRY-EDTA的消化液消化细胞，待细胞由长梭形逐渐变圆并飘起时，用新的无血清完全培养基终止消化；收集细胞并使之混匀，取样计数后离心；用无血清培养基重悬后并进行接种，培养3～4d时细胞融合度80％～90％进行细胞收获，经多次传代后即获得P1、P2、P3.......代细胞；收集第3-5代细胞可用于后续实验。
全文数据：
权利要求：
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