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申请/专利权人：芜湖耄智生物科技有限公司;杭州耄智生物科技有限公司

摘要：本发明提供一种阿尔茨海默相关神经丝蛋白AD7C‑NTP的检测试纸条、制备方法及应用，该试纸条包括样品垫、胶体金结合垫、NC硝酸纤维素膜、吸水垫及PVC胶板；按照待测样品流动方向样品垫、胶体金结合垫、NC硝酸纤维膜和吸水纸依次粘结在PVC胶板上，其中，胶体金结合垫和吸水垫分别交错搭接在NC硝酸纤维膜的两端，所述样品垫搭接在胶体金结合垫上；按待测样品流动方向，所述NC硝酸纤维膜上依次设有检测线T和质控线C；所述胶体金结合垫上包被有一抗，所述检测线T上包被有二抗，所述一抗和二抗为两条不同的鼠抗人神经丝蛋白AD7C‑NTP单克隆抗体IgG，所述质控线C上包被羊抗鼠IgG多克隆抗体。

主权项：1.一种阿尔茨海默相关神经丝蛋白AD7C-NTP的检测试纸条，其特征在于：包括样品垫、胶体金结合垫、NC硝酸纤维素膜、吸水垫及PVC胶板；按照待测样品流动方向样品垫、胶体金结合垫、NC硝酸纤维膜和吸水纸依次粘结在PVC胶板上，其中，胶体金结合垫和吸水垫分别交错搭接在NC硝酸纤维膜的两端，所述样品垫搭接在胶体金结合垫上；按待测样品流动方向，所述NC硝酸纤维膜上依次设有检测线T和质控线C；所述胶体金结合垫上包被有一抗，所述检测线T上包被有二抗，所述一抗和二抗为两种不同的鼠抗人神经丝蛋白AD7C-NTP单克隆抗体IgG，所述质控线C上包被羊抗鼠IgG多克隆抗体；所述一抗的浓度为1.5ngmL，所述二抗的浓度为1.5ngmL；试纸条的制备方法如下：1）胶体金溶液的制备1.1容器的清洁：容器表面的污染会干扰金颗粒的生成，所有容器使用前经过酸洗；反复使用的器皿以金溶液润洗后超纯水淋洗即可；1.2金颗粒制备：取0.5mL1%氯金酸，加入到49.5mL超纯水中，置于100mL圆底烧瓶内，磁力搅拌加热至沸腾，使用注射器、一次性0.22μm过滤器迅速一次性加入预热至60-70℃、体积为5ml的2%二水合柠檬酸三钠，继续搅拌煮沸15分钟，关闭磁力搅拌器，冷却进行金颗粒检测；1.3金颗粒检测：肉眼观测溶液呈酒红色，分光光度计扫描吸收值，在520nm±5nm附近有最高吸收峰；2）胶体金结合垫的制备：用量筒量取步骤1）制备的胶体金溶液，加入浓度为0.1M的Na2HPO4.12H2O溶液中，胶体金溶液与Na2HPO4.12H2O溶液的体积比为1%，在磁力搅拌机上用溶度为1M的NaOH调节pH值为7.5-8.5，加入一抗继续搅拌30min，然后加入浓度为100gL的稳定剂BSA，BSA的体积百分含量为1%，继续搅拌20min，获得胶体金-一抗复合物原溶液；最后10000r转速、10℃离心30min，去除上清，用金标保存液重悬，涡旋混匀，即得胶体金-一抗结合物溶液，备用；所用金标保存液的体积为原溶液的1%；用等体积金标稀释液对胶体金-一抗结合物溶液进行稀释，涡旋混匀，用三维点膜喷金仪以喷量为6uLcm的速度均匀喷涂在宽6mm、长30cm的胶体金结合垫上，然后置于37℃烘箱中烘干2-4h、备用；3）检测线T和质控线C的制备：将NC硝酸纤维膜平整贴在PVC胶板中央位置，用包被缓冲液分别稀释二抗和羊抗鼠IgG多克隆抗体，采用三维点膜喷金仪将稀释好的二抗和羊抗鼠IgG多克隆抗体以喷量为1μLcm的速度均匀分别包被在检测线T和质控线C上，检测线T和质控线C之间的距离为0.5cm，然后置于37℃烘箱烘12-16h、备用；4）样本垫的制备：将玻璃纤维裁成宽16mm、长30cm的玻纤条，置于网架上，每条玻纤条用3.5mL样本垫处理液喷涂均匀，置于37℃烘箱烘12-16h、备用；5）组装和剪切：将胶体金结合垫贴在靠近检测线T一侧PVC胶板上，且一端与NC硝酸纤维膜搭接0.5mm，将样本垫搭接在胶体金结合垫的另一端，搭接0.5mm，吸水垫贴在靠近质控线C一侧的PVC胶板上，并与NC硝酸纤维膜搭接0.5mm，胶体金结合垫和样本垫上设有保护膜，保护膜与NC硝酸纤维膜搭接1mm；吸水垫上设有保护膜，保护膜与NC硝酸纤维膜搭接1mm；将组装完成的PVC胶板切割2.5mm试纸条，即得成品；所述金标保存液的配置过程如下：80mL超纯水中加入1.79gNa2HPO4.12H2O，1gBSA，0.05g防腐剂Proclin300，搅拌至完全溶解，用1M盐酸调节pH至8.0，加超纯水定容至100mL即为金标保存液；所述金标稀释液的配置过程如下：80mL超纯水中加入1.79gNa2HPO4.12H2O，0.5gCaseinNa，1gTween-20，20g蔗糖，0.05g防腐剂Proclin300，搅拌至完全溶解，用1M盐酸调节pH至8.0，加超纯水定容至100mL即为金标稀释液；所述包被缓冲液的配置过程如下：80mL超纯水中加入1.79gNa2HPO4.12H2O，0.9gNacl，2g蔗糖，0.05g防腐剂Proclin300，搅拌至完全溶解，用1M盐酸调节pH至8.0，加超纯水定容至100mL即为包被缓冲液；所述样本垫处理液的配置过程如下：80mL超纯水中加入3.58gNa2HPO4.12H2O，0.5gCaseinNa，0.9gNacl，1gS9，1gPVP，0.05g防腐剂Proclin300，搅拌至完全溶解，用1M盐酸调节pH至8.0，加超纯水定容至100mL即为样本垫处理液。

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