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申请/专利权人：复旦大学
摘要：本发明涉及一种用于床旁对实体器官移植中细菌和真菌核酸快速提取及检测的方法，具体为：待测样本基因组DNA提取：取待测样本放置于离心管中，部分待测样本进行预处理；通过离心操作，取得沉淀物，向沉淀物中加入细胞裂解液，涡旋后，加热裂解细菌和真菌细胞壁，并释放其核酸；环介导等温扩增：以待测样本DNA为模板，使用环介导等温扩增方法对提取得到的细菌和真菌基因组DNA进行检测，收集荧光信号，根据荧光扩增曲线分析结果，以此实现对实体器官移植中微量细菌和真菌的检测。本发明方法检测所需总时间更短。样本需求量小。该方法特异性强、灵敏度高。
主权项：1.一种用于床旁对实体器官移植中细菌和真菌核酸快速提取及检测的方法，其特征在于包括以下步骤：（1）待测样本基因组DNA提取：取待测样本放置于离心管中，部分待测样本进行预处理；通过离心操作，取得沉淀物，向沉淀物中加入细胞裂解液，涡旋后，加热裂解细菌和真菌细胞壁，并释放其核酸；（2）环介导等温扩增：以待测样本DNA为模板，使用环介导等温扩增（LAMP）方法对提取得到的细菌和真菌基因组DNA进行检测，收集荧光信号，根据荧光扩增曲线分析结果，以此实现对实体器官移植中微量细菌和真菌的检测；（2．1）、取5μL的待测样本DNA模板和20μL的LAMP反应液于PCR排管，混匀后短暂离心，去除盖子和管壁上的液体；（2．2）、将PCR排管置于便携式PCR仪中，在60～70℃下反应45min，每1min检测荧光信号；（2．3）、通过扩增曲线判断检测结果。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 复旦大学 一种用于床旁对实体器官移植中细菌和真菌核酸快速提取及检测的方法
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