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申请/专利权人：北京大学人民医院

摘要：本发明提供了一种鉴定AML患者骨髓中NK细胞耗竭的研究方法及其应用。其中，该方法为：研究AML患者复发时骨髓中NK细胞的成熟度表型，并在确定所述NK细胞的成熟度后，基于受体标志物研究所述AML患者复发时抑制性受体在NK细胞上是否处于过度表达；接着，进一步通过研究所述AML患者复发后NK细胞的抗肿瘤功能变化、增殖能力以及转录组学分析，来鉴定AML患者骨髓中NK细胞的耗竭现象。本发明提供的方法，首次为白血病引起的NK细胞耗竭，提供了系统地研究方法，并证实了HSCT后AML复发患者存在NK细胞耗竭现象，同时，NKG2A+NK细胞的高频率表达与复发风险相关。因此，本申请提供的研究方法，在研究和判断HSCT后AML患者NK细胞是否耗竭中具有巨大的应用价值。

主权项：1.一种鉴定AML患者骨髓中NK细胞耗竭的研究方法，其特征在于，所述方法为：研究AML患者复发时骨髓中NK细胞的成熟度表型，并在确定所述NK细胞的成熟度后，基于受体标志物研究所述AML患者复发时抑制性受体在NK细胞上是否处于过度表达；接着，进一步通过研究所述AML患者复发后NK细胞的抗肿瘤功能变化、增殖能力以及转录组学分析，来鉴定AML患者骨髓中NK细胞的耗竭现象，所述受体标志物为NKG2A且将所述NKG2A作为白血病NK细胞衰竭耗竭的检查点；所述方法包括以下步骤：步骤1，设置复发组、CR组和HC组，并收集各组中每例的骨髓采集物BM；其中，所述CR组为移植后AML完全缓解的患者，所述HC组为健康供者组；步骤2，根据对所述复发组、所述CR组和所述HC组进行的NK细胞表型分析，研究AML复发患者NK细胞的耗竭表型；并根据所述耗竭表型，进一步研究所述AML复发患者NK细胞的抗肿瘤功能变化；步骤3，将来源于骨髓细胞的纯化的NK细胞，分别与原代AML细胞共培养4小时、24小时和48小时，并用7-AAD和AnnexinV标记，研究所述NK细胞对原代AML细胞的杀伤作用；以MHC-Ⅰ类缺陷的人红白血病K562细胞株为靶细胞，用CD107a的表达和IFN-γ的分泌来进行测定NK细胞的细胞毒性和细胞因子分泌；通过分析IFN-γ的产生、CD107a的表达以及对原代AML细胞的杀伤能力，来研究所述AML复发患者NK细胞的抗肿瘤功能变化；步骤4，通过组学分析，研究移植后所述AML复发患者NK细胞的耗竭表型；所述研究方法为非诊断目的鉴定AML患者骨髓中NK细胞耗竭的方法。

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