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申请/专利权人：中国科学院遗传与发育生物学研究所
摘要：本发明公开了一种体外重组水稻SCFD3E3连接酶的方法及其应用。本发明运用从转基因愈伤组织中获取的SCFD3E3连接酶复合体，筛选鉴定到与SCFD3E3连接酶高效特异协同工作的E2蛋白：OsUBC14；本发明利用昆虫杆状病毒表达体系获取有活性的D3蛋白和Cullin1蛋白。本发明的以上两个方面是克服植物多亚基SCFE3连接酶体外活性重组体系建立中最大的困难。体外重组水稻SCFD3E3连接酶活性体系的建立，为深入研究独脚金内酯信号感知、传递等提供了一个高效、可靠的方法平台。本发明对于阐明植物激素信号途径的分子机理和多亚基E3连接酶的分子机理均具有重要的作用和广泛的潜在应用前景。
主权项：1.一种体外使水稻中目标蛋白泛素化的方法，包括如下步骤：将D3蛋白、Cullin1蛋白、SKP1蛋白、RBX1蛋白、E2蛋白、水稻来源的泛素蛋白、水稻来源的泛素活化酶和水稻来源的目标蛋白在含有ATP和MgCl2的反应体系中反应，实现体外水稻来源目标蛋白的泛素化；所述Cullin1蛋白的基因编号为LOC_Os01g27150；所述RBX1蛋白的基因编号为LOC_Os01g01700；所述D3蛋白的基因编号为LOC_Os06g06050；所述SKP1蛋白的基因编号为LOC_Os09g36830；所述E2蛋白为OsUBC14、OsUBC16或OsUBC23蛋白；所述OsUBC14蛋白的基因编号为LOC_Os01g46926；所述OsUBC16蛋白的基因编号为LOC_Os04g57220；所述OsUBC23蛋白的基因编号为LOC_Os01g60360；所述Cullin1蛋白具有NEDD8修饰；所述水稻来源的泛素蛋白的基因编号为LOC_Os03g18380；所述水稻来源的泛素活化酶的基因编号为LOC_Os05g42424；所述SKP1蛋白和所述RBX1蛋白均是通过原核表达制备获得的；所述D3蛋白是利用昆虫杆状病毒表达载体共表达D3蛋白和SKP1蛋白制备得到的；所述Cullin1蛋白是利用昆虫杆状病毒表达载体共表达Cullin1蛋白和RBX1蛋白制备获得的。
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百度查询： 中国科学院遗传与发育生物学研究所 一种体外重组水稻SCF(D3)E3连接酶的方法及其应用
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