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申请/专利权人：齐鲁工业大学(山东省科学院)

摘要：本发明涉及淀粉生产技术领域，具体公开了一种适用于酱料生产的酶改性淀粉增稠剂及其制备方法。该适用于酱料生产的酶改性淀粉增稠剂制备方法，具体包括以下步骤：S1，制备HCDG4A融合酶；S2，玉米淀粉液的配制；S3，HCDG4A融合酶酶解；S4，提取酶改性淀粉颗粒；该适用于酱料生产的酶改性淀粉增稠剂制备方法通过本发明提供的适用酱料生产的酶改性淀粉增稠剂的制备方法制备的淀粉增稠剂具有较高的透明度和粘度，能够有效地增加酱料的黏度和稠度，改善酱料的口感和质地；并且本发明中的HCDG4A融合酶制备过程绿色环保、安全无害，制备工艺简单，使得生产过程更加高效。

主权项：1.一种适用于酱料生产的酶改性淀粉增稠剂制备方法，其特征在于，以玉米淀粉为原料，利用HCDG4A融合酶制备酶改性玉米淀粉，具体步骤包括：S1，制备HCDG4A融合酶：S11，转化感受态细菌：将待转化的质粒与感受态细菌混合；将混合物置于冰上孵育转化；将转化后的细菌液铺在含有抗生素的琼脂平板上，培养过夜，形成单克隆；S12，单克隆挑选与培养：从转化后的平板中挑选单个克隆，并转移到含有LB培养液的试管中，在摇床上过夜培养，使细菌生长并扩增目标基因；S13，诱导融合蛋白表达：从过夜培养物中取一定量的细菌，室温离心，去除上清液，向剩余的培养物中加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷，诱导目标基因的表达；S14，细胞破碎和蛋白提取：取出经诱导的培养物，室温离心，去除上清液，将细菌沉淀用含有PMSF的缓冲液重悬，然后进行超声波破碎，分别取上清液和沉淀液，加入适量的TBS缓冲液中进行蛋白提取；S15，Ni-NTA亲和层析与酶切后再次纯化：将上清液样品加载至预平衡的Ni-NTA亲和层析柱中，使用Ni-NTA洗脱缓冲液洗脱目标蛋白，并收集流出液，将收集的流出液加入酶切缓冲液中，添加sumo酶，并过夜进行酶切，再次将样品加载至Ni-NTA亲和层析柱中，使用洗脱缓冲液洗脱目标蛋白，并收集流出液，对收集的流出液进行SDS-PAGE分析；S2，玉米淀粉液的配制：将玉米淀粉配置成重量比为10％的淀粉液，单位为wv；S3，HCDG4A融合酶酶解：向淀粉液中加入纯化鉴定的HCDG4A融合酶，于水浴中振荡水解，灭酶活性，冷却得到酶解液；S4，提取酶改性淀粉颗粒：向样液中加入无水乙醇，离心，所得沉淀经冷冻干燥得到酶改性淀粉颗粒。

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