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申请/专利权人：湘江实验室

摘要：本发明提供了一种基于EP管和纳米酶水凝胶薄膜的前列腺特异性抗原的检测方法。该方法以EP管为反应载体，将EP管功能化构建PSA响应型平台，利用DNAzyme及AuPtNPs纳米酶作为信号放大器，通过DNAzyme循环切割DNA水凝胶网络并释放大量AuPtNPs纳米酶，以及AuPtNPs纳米酶的优良类过氧化物酶活性，有效实现了体系的信号放大，增加了灵敏性。通过简单的“倒置‑翻转”操作，实现PSA的识别与检测，极大的简化了实验操作，具有用户友好性。本发明可实现0.5‑100ngL浓度范围内PSA的检测，对经过稀释后的患者血清仍具有足够的检测灵敏度。

主权项：1.一种基于EP管和纳米酶水凝胶薄膜的前列腺特异性抗原的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：S1：设计多条DNA序列：DNA-A、DNA-B、DNA-C、PSA适配体；S2：将所述DNA-A及DNA-B分别修饰于AuPtNPs纳米酶上，得到A-AuPtNPs及B-AuPtNPs；S3：在EP管的管盖内表面、管壁内侧均沉积一层聚多巴胺薄膜，再分别在EP管的管盖内表面、管壁内侧上修饰PSA适配体、DNA-C，且在EP管的管盖中加入Ag+进行反应，分别得到具有适配体发夹探针的EP管的管盖和DNA-C功能化的EP管的管壁；S4：在底物链S的存在下，将所述A-AuPtNPs及B-AuPtNPs通过层层自组装组装于EP管的管壁，得到负载有AuPtNPs-DNA水凝胶薄膜的EP管的管壁；S5：取一系列不同浓度的标准PSA溶液分别滴至EP管的管盖中，且均滴入掩蔽剂及DNAzyme进行特异性结合反应；S6：将EP管倒置触发DNAzyme切割AuPtNPs-DNA水凝胶薄膜，得到含有AuPtNPs纳米酶的反应液；S7：将所述含有AuPtNPs纳米酶的反应液分别移取至空白EP管中，加入缓冲液、3,3',5,5'-四甲基联苯胺及过氧化氢反应后，使用紫外可见分光光度计测试吸光度；S8：将测得的不同浓度的标准PSA溶液的吸光度与对应的标准PSA溶液的浓度作标准曲线；S9：取待测PSA溶液、掩蔽剂及DNAzyme滴至EP管的管盖中，进行特异性结合反应，再按照步骤S6-S7进行操作，得到相应的吸光度，且根据所作标准曲线，即可计算得到待测PSA溶液中PSA的浓度。

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