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申请/专利权人：长沙干细胞与再生医学工业技术研究院有限公司
摘要：本发明提供了一种有效治疗卵巢功能减退的羊膜间充质干细胞的筛选方法，属于细胞治疗技术领域。本发明对不同来源或批次的羊膜间充质干细胞或其外泌体的miRNA320a进行RT‑qPCR检测，根据不同的羊膜间充质干细胞或其外泌体miRNA320a的表达量存在一定的差异，表明miRNA320a的表达量使羊膜间充质干细胞对卵巢功能减退的治疗起关键调节作用，且通过羊膜间充质干细胞培养上清与过氧化氢处理后的卵巢颗粒细胞共培养后卵巢颗粒细胞中miRNA320a的表达补充验证进一步确定本发明筛选方法的合理性。因此，采用本发明提供的筛选方法能够得到符合有效治疗卵巢功能减退标准的人羊膜间充质干细胞，具有重要的医学价值和经济价值。
主权项：1.一种有效治疗卵巢功能减退的羊膜间充质干细胞的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：分别提取待检测的羊膜间充质干细胞和卵巢颗粒细胞的RNA；分别以提取的RNA为模板，合成第一链cDNA；以合成的第一链cDNA为模板，利用qPCR技术检测细胞中miRNA320a的表达水平，根据miRNA320a的表达水平，判断羊膜间充质干细胞外泌体在治疗卵巢功能减退方面的有效性：当羊膜间充质干细胞中miRNA320a的表达量为卵巢颗粒细胞表达量2倍以上，则间充质干细胞外泌体具有有效治疗卵巢功能减退的作用；反之，则认为不具有治疗卵巢功能减退的作用；所述羊膜间充质干细胞为人羊膜间充质干细胞；所述羊膜间充质干细胞外泌体为羊膜间充质干细胞培养上清；所述羊膜间充质干细胞培养上清的制备方法，将复苏后的人羊膜间充质干细胞接种至MSC-Q完全培养基中培养，分离上清；所述培养的时间为3～4d；所述人羊膜间充质干细胞的接种密度为0.7～0.95×104cm2；所述分离上清包括离心和滤膜过滤；所述离心的条件为3000rpm离心5min；所述滤膜过滤中滤膜的孔径为0.22μm。
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