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申请/专利权人：罗义

摘要：一种通过选择性吸附刺突糖蛋白富集并检测侵染性新冠病毒的方法，首先以新冠病毒S蛋白为模板，以羧基化的碳纳米管为载体，以丙烯酰胺为功能单体通过聚合反应制备新冠病毒蛋白选择性吸附材料，用于富集环境中新冠病毒，对富集的新冠病毒进行分离培养、菌株鉴定确定新冠病毒的种类。本发明中选择性吸附S蛋白的MIP材料对新冠病毒S蛋白具有较高的吸附能力，吸附量达65‑120mgg材料，可用于空气和水体等环境中新冠病毒的选择性吸附。选择性吸附核蛋白的MIP材料对新冠病毒S蛋白具有较快的吸附速率，一级动力学速率常数达0.00012‑0.0002mgs，因此能在短时间吸附足够的新冠病毒用于后续的检测。

主权项：1.一种通过选择性吸附刺突糖蛋白富集并检测侵染性新冠病毒的方法，所述方法为非疾病诊断方法，其特征在于：首先利用分子印迹选择性识别模板的特性，制备了一种新冠病毒S蛋白选择性吸附材料，进而利用此材料富集环境中具备侵染能力的新冠病毒，对富集的新冠病毒进行分离培养，即可检测环境中侵染性新冠病毒；该新冠病毒S蛋白选择性吸附材料以新冠病毒S蛋白为模板，以具有磁性的纳米四氧化三铁为载体，以丙烯酰胺为功能单体通过聚合反应制备得到；制备的新冠病毒S蛋白选择性吸附材料的结构为内外两层，内层为具有磁性的纳米四氧化三铁，外层为聚丙烯酰胺聚合层，聚丙烯酰胺聚合层中镶嵌有病毒S蛋白印迹；制备的材料的直径为10-50nm，丙烯酰胺的质量占比为15％～30％；制备的材料对新冠病毒的吸附量达65-120gg材料，吸附动力学速率常数达0.00012-0.0002mgs；具体步骤如下：1将包裹二氧化硅的纳米四氧化三铁磁珠nFe3O4，粒径为10-50nm，溶于去离子水，超声分散为稳定悬浊液，加入N-羟基琥珀酰亚胺NHS和碳二亚胺盐酸盐EDAC振荡后用磁铁分离并清洗nFe3O4；nFe3O4和NHS的质量比在4～10:1，nFe3O4和EDAC的质量比在4～15:1；2将步骤1中的nFe3O4溶于含市售新冠病毒S蛋白的缓冲溶液，2～8℃下充分振荡，加入三羟甲基氨基甲烷Tris溶液，充分振荡后用磁铁分离，去离子水清洗得到负载S蛋白的nFe3O4；nFe3O4和新冠病毒S蛋白的质量比在20～80:1；nFe3O4和Tris的质量比为0.1～0.5:1；3将步骤2中负载S蛋白的nFe3O4在PIPES溶液中重悬后，加入丙烯酰胺AAM、N,N’-dimethylacrylamide和过硫酸盐，振荡3-6小时后通过磁铁分离，去离子水清洗得到负载未洗脱印迹的nFe3O4；nFe3O4和AAM的质量比在0.5～2:1；nFe3O4和N,N’-dimethylacrylamide的质量比在0.25～1:1；nFe3O4和过硫酸盐的质量比在2～8:1；4将步骤3中的负载未洗脱印迹的nFe3O4加入碱性次氯酸盐溶液振荡2-6h后充分清洗，干燥后得到新冠病毒蛋白印迹材料MIP；5将步骤4中制备的MIP浸入待检测的环境样本中搅拌10-30min后用磁铁将MIP分离；随后将吸附了新冠病毒的MIP加入至细胞生长液，置37℃培养箱培养，获得新冠病毒侵染的阳性细胞；将细胞分离物提取核酸后，通过逆转录PCR的方法鉴定；另外对新冠病毒通过梯度培养的方法，4天初步观察CPE，7天判定结果，按Reed-Muench的方法测定病毒株效价；加入至环境样本中的MIP的浓度为10-100mgL。

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百度查询： 罗义 一种通过选择性吸附刺突糖蛋白富集并检测侵染性新冠病毒的方法