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申请/专利权人：星童医疗技术(苏州)有限公司

摘要：本发明公开了白介素‑10含量检测试剂盒、制备方法及其应用方法，其中白介素‑10含量检测试剂盒包括用于放置石英针生物传感器的探针孔、用于容纳样本的试剂孔1、用于容纳标记生物素的抗白介素‑10抗体的试剂孔2、用于容纳多聚糖标记的链霉亲和素荧光物质的试剂孔3以及用于容纳清洗液的清洗孔1、清洗孔2、清洗孔3、清洗孔4、清洗孔5、清洗孔6、清洗孔7、清洗孔8和清洗孔9。本方案使捕获抗体通过疏水性结合牢固、均一地固定于石英针生物传感器表面，同时利用抗体‑抗原‑抗体的结构以及二次反应二次结合的包被过程提升了检测信号水平，可以检测到更低浓度白介素‑10，提高了检测灵敏度。

主权项：1.白介素-10含量检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：（1）将氨丙基修饰后的石英针的底部表面包被捕获抗体后烘干，制成石英针生物传感器；（2）将标记生物素的抗白介素-10抗体用保存液室温下稀释到1ugmL后，于2℃-8℃保存待用；（3）将多聚糖标记的链霉亲和素荧光物质用保存液室温下稀释到5ugmL后，于2℃-8℃保存待用；（4）制备浓度为10mM、PH值为7.4的PBST清洗液，并将清洗液分装为每瓶100mL，均于2℃-8℃保存待用；（5）将步骤（1）制备的石英针生物传感器放入探针孔内，将步骤（2）制备的稀释后的标记生物素的抗白介素-10抗体倒入相应试剂孔，将步骤（3）制备的稀释后的多聚糖标记的链霉亲和素荧光物质倒入相应试剂孔，将步骤（4）制备的清洗液倒入清洗孔；步骤（1）中，捕获抗体包括30ugmL的抗FITC抗体和浓度为20ugml的荧光素标记的白介素-10抗体；步骤（1）包括以下步骤：制备30ugmL的抗FITC抗体和浓度为20ugml的荧光素标记的白介素-10抗体；用APS修饰的石英针置于30ugmL的抗FITC抗体溶液中反应900s，转速500rpm，然后置于封闭溶液中封闭60s，转速500rpm，之后置于浓度为10mM的PBST溶液中清洗20s，转速500rpm；再置于20ugml的荧光素标记的白介素-10抗体溶液中反应180s，转速500rpm；最后置于封闭溶液中封闭10s，转速500rpm；将包被完成后的石英针在40℃的温度下烘干5h后制成石英针生物传感器，并保存在干燥环境中待用；所述多聚糖标记的链霉亲和素荧光物质为用Ficoll-400聚蔗糖标记的链霉亲和素荧光物质Cy5和吖啶酯。

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