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申请/专利权人：滨州医学院;山东祥隆医药研究院有限公司

摘要：本发明公开了一种会厌逐瘀汤指纹图谱的建立方法及其指纹图谱，属于中药复方质量标准检测领域。所述指纹图谱的构建方法，包括如下步骤：会厌逐瘀汤煎煮液的制备；对照品溶液的制备；供试品和对照品色谱图的测定；指纹图谱的构建。使用的色谱方法：色谱柱为C18柱，测定波长为238nm，使用乙腈和0.1％磷酸水梯度洗脱，柱温为25℃，进样体积为20μL，流速为1.0mLmin，洗脱时间为30分钟。建立的方法具有用时短、稳定性好、容易操作、重复性好的优点。建立的会厌逐瘀汤指纹图谱含15个共有峰，涵盖了方中的多数活性成分，能够系统而全面地反映会厌逐瘀汤的质量，为该复方的质量控制提供了新的方法和依据。

主权项：1.一种会厌逐瘀汤指纹图谱的建立方法及其指纹图谱，其特征在于，包括以下步骤：1分别称取桃仁炒和红花粗粉各5克，甘草和桔梗粗粉各3克，生地粗粉4克，当归，枳壳和赤芍粗粉各2g，玄参和柴胡粗粉各1克，混合后加水浸泡20分钟后，加热煎煮，趁热过滤，离心，获得会厌逐瘀汤煎煮液，冷冻干燥后得会厌逐瘀汤冻干粉；2称取适量的羟基红花黄色素A、芍药苷、柚皮苷、新橙皮苷、甘草苷和甘草酸铵六种对照品，加入一定浓度甲醇溶液，超声溶解后，定容于5mL的容量瓶中，得到六种对照品的混合溶液；3精密称取一定量不同批次的会厌逐瘀汤冻干粉，加入一定浓度的甲醇超声溶解后，定容到10mL，得到会厌逐瘀汤样品溶液，过微孔滤膜后，注入高效液相色谱仪，得到各批次会厌逐瘀汤的色谱图；吸取混合对照品溶液，过微孔滤膜后，注入高效液相色谱仪，得到混合对照品溶液的色谱图；4把15批次的会厌逐瘀汤样品溶液色谱图导入“2012版中药色谱指纹图谱相似度评价系统”构建指纹图谱，选择15批次样品溶液色谱图中均含有的色谱峰做为共有峰，生成对照指纹图谱，通过与混合对照品溶液比识别共有峰，选择8号共有峰做为参照峰，计算其他共有峰的相对保留时间和相对峰面积，评价各批次样品的相似度；所述的步骤1中，加水量为20倍，煎煮时间为20分钟，煎煮次数为2次；所述的步骤2中，所用的甲醇溶液体积分数为30％-70％；所述的步骤3中，称取的会厌逐瘀汤冻干粉的质量为20-50mg，所用的甲醇溶液的体积分数为20％-60％；所述的步骤3中，使用的色谱柱为HESPODS-AC18柱，4.6×250mm，5μm，流动相A为乙腈，B为0.1％磷酸水，梯度洗脱条件如下：0～6min，10％～20％A；6～19min，20％～30％A；19～24min，30％～50％A；24～29min，50％～70％A；29～30min，70％～100％A；检测波长为238nm，柱温为25℃，进样体积设置为20μL，流速为1.0mLmin；所述的步骤4中，构建的会厌逐瘀汤指纹图谱共包含15个共有峰，其中1号共有峰为羟基红花黄色素A、3号共有峰为芍药苷、5号共有峰为甘草苷、8号共有峰为柚皮苷、9号共有峰为新橙皮苷、15号共有峰为甘草酸铵；以8号共有峰作为参照峰，其他共有峰的相对保留时间分别为：峰1：0.524-0.537；峰2：0.661-0.668；峰3：0.709-0.716；峰4：0.821-0.842；峰5：0.870-0.880；峰6：0.880-0.898；峰7：0.922-0.932；峰8：1；峰9：1.089-1.106；峰10：1.264-1.279；峰11：1.418-1.439；峰12：1.473-1.495；峰13：1.502-1.531；峰14：1.523-1.546；峰15：1.560-1.584；相对峰面积为：峰1：1.058-1.854；峰2：0.48-1.425；峰3：0.943-1.466；峰4：0.351-0.901；峰5：0.477-0.891；峰6：0.27-0.428；峰7：0.041-0.126；峰8：1；峰9：1.162-1.379；峰10：0.259-0.599；峰11：0.064-0.104；峰12：0.122-0.241；峰13：0.07-0.11；峰14：0.082-0.115；峰15：0.345-0.603；所述的步骤4中，各批次样品的相似度均大于0.97。

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