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申请/专利权人：南方医科大学第五附属医院

摘要：本发明公开了一种丝状真菌小培养多胶封固示教片的制作方法，包括以下步骤：1）多种胶的配置：配置内层胶、配置防腐内层胶、配置防腐胶状棉兰染液、配置外层胶；2）制作小培养揭片：选择培养基切琼脂块、点种真菌、盖圆盖片、培养足够时间揭片；3）封片操作：酒精预处理、方圆盖片用内层胶组合、封中层胶、方圆盖片组合翻面、封外层胶、晾干。本发明的制作方法新颖、独特，能将丝状真菌小培养长期封固在玻片内，能解决琼脂块涂片法的生物安全、漏气褪色、皮肤癣菌生长不良、细微结构被破坏的问题，能够解决双层套封片法的视野模糊、不能使用油镜和相差镜的问题。可用于丝状真菌的疑难病例诊断、真菌种类准确鉴定、长期保存教学使用。

主权项：1.一种丝状真菌小培养多胶封固示教片的制作方法，包括以下步骤：1）多种胶的配置A1配置8%-12%聚乙烯醇polyvinylalcohol的内层胶；A2配置含10%甲醛的6%-9%聚乙烯醇的防腐内层胶；A3配置6%-9%PVA-10%HCHO-棉兰的防腐胶状棉兰染液；A4配置环氧树脂-水晶滴胶；2）制作小培养揭片B1选择培养基类型：根据所需培养的丝状真菌特性，选择合适的9cm培养基；B2切琼脂块：在培养基边缘用灭菌手术刀切一块5-7mm的梯形琼脂块，翻出至培养基上，梯形长边对着培养基外沿；B3点种成熟丝状真菌：待接种的丝状真菌需培养成熟后方可点种，点种在梯形琼脂块的三个短边；B4盖圆形盖片：取直径18mm的圆形盖玻片，火焰灭菌后放凉，偏位盖在梯形琼脂块上，梯形琼脂块的长边靠近圆形盖片的外沿；B5培养足够时间：不同丝状真菌生长速度不同，生长所需的温度也不同，根据所需培养的丝状真菌特性，选择适合培养的丝状真菌的温度进行培养培养，并培养足够时间，以便特征的产孢结构出现；B6揭片：待培养足够时间后，将小培养圆形盖玻片揭下来翻面待用；3）封片操作C195%酒精预处理：揭下来的18mm小培养圆形盖玻片，先在有菌一面滴加20μl95%酒精，使得菌丝更加贴伏玻片也更加亲水减少气泡，自然晾干后封内层胶；C2方圆盖片用内层胶组合：取一张24*50mm方形盖玻片，在其中央滴一滴防腐内层胶或防腐胶状棉兰染液，将长有小培养的圆形盖玻片朝下，盖在内层胶或防腐胶状棉兰染液上，得到方圆盖片组合；C3封中层胶：方圆盖片组合后，静置3分钟，使用贝索封片胶BA7004在圆形盖片外围封一圈，晾干2小时直至索封片胶BA7004干透；C4方圆盖片组合整体翻面：方圆盖片组合整体翻面朝下；C5封外层胶：提前配置好环氧树脂-水晶滴胶，用混匀器混匀20分钟，再静置20分钟，取一张载玻片，用胶头滴管在载玻片上均匀滴加10滴准备好的环氧树脂水晶滴胶，将翻面的方圆盖片组合封固在胶上，得到丝状真菌小培养多胶封固示教片；C6晾干：将所得到的丝状真菌小培养多胶封固示教片平放晾干24小时。

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