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申请/专利权人：厦门镜祥医药科技有限公司
摘要：本发明提供了一种基于MALDI‑TOF‑MS体外筛选hMAT2A蛋白抑制剂的方法及其应用，涉及稳定同位素标记新药物发现技术领域。本发明提供了一种基于MALDI‑TOF‑MS体外筛选hMAT2A蛋白抑制剂的方法，通过MALDI‑TOF‑MS直接测定同位素标记的酶催化产物SAM与SAM‑D3的信号比值来相对定量与定性抑制剂的效果，克服了目前通过检测反应物ATP的含量而因ATP易水解带来的假阳性结果，同位素标记的引入解决了系统误差，操作简单，检测时间短1分钟样品；MALDI‑TOF‑MS的样品靶可重复利用，从而实现了MAT2A抑制剂的高通量筛选。
主权项：1.一种基于MALDI-TOF-MS体外筛选hMAT2A蛋白抑制剂的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：将待测药物、hMAT2A和反应液混合孵育，然后加入ATP和L-Met进行反应，离心后得到实验组上清；将二次纯化水、hMAT2A和反应液混合孵育，然后加入ATP和L-Met-D3进行反应，离心后得到对照组上清；将实验组上清与对照组上清混合得到待测样本，所述待测样本与基质混合后进行MALDI-TOF-MS测试，通过比较实验组与对照组的峰强度即可判断待测药物对hMAT2A蛋白的抑制效果；所述反应液由100mMHepes溶液、50mMKCl溶液和10mMMgCl2溶液组成；所述孵育的温度为20-30℃，时间为30-60min；所述待测药物、hMAT2A和反应液的体积比为0.5～1:0.2～1:6.2～7.5；所述待测药物、ATP和L-Met的体积比为0.5～1:1:0.8～1；所述反应的温度为20-30℃，时间为30-60min；所述实验组上清与对照组上清的体积比为1:1；所述待测样本与基质的体积比为1:1。
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百度查询： 厦门镜祥医药科技有限公司 一种基于MALDI-TOF-MS体外筛选hMAT2A蛋白抑制剂的方法及其应用
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