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申请/专利权人：河南省尤里卡生物科技有限公司

摘要：本发明公开了一种尿激酶的纯化方法，属于生物工程及化学工程领域。所述纯化方法包括以下步骤：取尿激酶粗品，加入乙醇、乙酸铵、磷酸钾溶液、乙酸钙溶液搅拌，得到尿激酶料液；在尿激酶料液中加入正丁酸铵溶液，离心过滤，得尿激酶上清液；将尿激酶上清液上吸附柱，用洗脱液Ⅰ洗脱吸附柱，收集洗脱液；洗脱液上吸附柱，用洗脱液Ⅱ洗脱吸附柱，收集洗脱液；洗脱液上亲和层析柱，用洗脱液Ⅲ洗脱亲和层析柱，收集洗脱液；洗脱液经超滤膜，加入磷酸钾溶液超滤，得超滤液；超滤液加入乙醇醇沉，离心，留取沉淀物、淀物经冷冻干燥得尿激酶。本发明提供的纯化方法原料来源广泛，制备方法简单、生产成本低、可实现工业化大规模生产。

主权项：1.一种尿激酶的纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）取尿激酶粗品，加入90%的乙醇、乙酸铵、浓度为0.15molL的磷酸钾溶液、浓度为0.25molL的乙酸钙溶液搅拌，得到尿激酶料液；（2）在步骤（1）中得到的尿激酶料液中加入浓度为2molL的正丁酸铵溶液，搅拌后，离心过滤，弃去沉淀，得尿激酶上清液；（3）吸附柱层析：①先用含0.3molL氯化钠、0.15molL磷酸的缓冲液平衡吸附柱，再将步骤（2）中得到的尿激酶上清液上吸附柱，再次用含0.3molL氯化钠、0.15molL磷酸的缓冲液洗脱吸附柱，收集洗脱液；②先用含0.5molL氯化钠、0.25molL磷酸的缓冲液平衡吸附柱，再将步骤①中得到的洗脱液上吸附柱，再次用含0.5molL氯化钠、0.25molL磷酸的缓冲液洗脱吸附柱，收集洗脱液；（4）先用洗脱液Ⅱ平衡吸附柱，再将步骤②中得到的洗脱液上吸附柱，再次用洗脱液Ⅱ洗脱吸附柱，收集洗脱液；（5）先用洗脱液Ⅲ平衡亲和层析柱，再将步骤（4）中得到的洗脱液上亲和层析柱，再次用洗脱液Ⅲ洗脱亲和层析柱，收集洗脱液；（6）将步骤（5）中得到的洗脱液经超滤膜，加入磷酸钾溶液超滤，得超滤液；（7）将步骤（6）中得到超滤液加入乙醇醇沉，离心，留取沉淀物；（8）将步骤（7）中得到的沉淀物经冷冻干燥得尿激酶；步骤（4）中所述洗脱液Ⅱ为氯化钠、磷酸钠的缓冲液；步骤（5）中所述洗脱液Ⅲ为含氯化钠、磷酸的缓冲液；步骤（1）中所述尿激酶粗品、乙醇、乙酸铵、磷酸钾溶液、乙酸钙溶液和步骤（2）中所述正丁酸铵溶液的用量比为1g：6.8mL：6.5g：2.5mL：2.5mL：4mL；步骤（6）中所述超滤的过程包括：先用0.1molL磷酸钾溶液进行超滤，再用0.2molL磷酸钾溶液进行超滤，最后用0.25molL磷酸钾溶液进行超滤；步骤（4）中所述洗脱液Ⅱ为含0.4molL氯化钠、0.4molL磷酸钠的缓冲液；步骤（5）中所述洗脱液Ⅲ为含0.4molL氯化钠、0.2molL磷酸的缓冲液；所述吸附柱为DEAE树脂柱；所述亲和层析柱填料为ArginineSepharose4B。

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