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申请/专利权人：浙江农林大学
摘要：本发明公开一种非组培依赖的发根农杆菌介导闽楠遗传转化方法，该方法包括如下步骤：1闽楠种子处理2闽楠种子的萌发和幼苗的培养3侵染液的制备4侵染5共培养6毛状根的诱导培养7转基因根的检测8复合型转基因株系的获得。本发明建立了稳定高效的闽楠遗传转化体系，获得含转基因根的复合型转基因株系，且该体系转化效率高，成功突破了闽楠转化难的技术障碍，为可用于育种资源的转基因复合植株及完整转基因植株的获得，及闽楠基因功能、次生代谢产物和转基因复合植株及完整转基因植株等方面的研究提供了技术支持。
主权项：1.一种非组培依赖的发根农杆菌介导闽楠遗传转化方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：（1）闽楠种子预处理：将成熟的闽楠果实收获后，去掉果皮，将种子清洗干净，阳光下晾晒至表面无水分附着，然后将种子4℃沙藏处理；（2）播种与育苗：将低温沙藏处理的种子播于湿沙中发芽生长至1-3片叶，得到所需闽楠幼苗；其中闽楠育苗阶段发芽后采用昼26℃夜22℃温度，光照16h黑暗8h，光照强度为30-50μmol·m-2·s-1，覆盖保鲜膜保湿，湿度为70%-85%；（3）侵染：用发根农杆菌对闽楠幼苗进行侵染，侵染后把幼苗移栽入已充分吸水的基质中，侵染部位被基质覆盖；其中侵染菌液浓度OD600为0.4-1.2，发根农杆菌菌种为K599,C58C1或MSU440；（4）共培养将上述侵染后闽楠幼苗黑暗条件下共培养1-3天；共培养条件是昼26℃夜22℃温度，并加盖保湿透明塑料罩进行全程保湿，湿度为70%-85%；（5）毛状根诱导培养，获得转化成功的阳性闽楠植株：将共培养后的闽楠幼苗进行毛状根的诱导培养，诱导培养的条件是：温度昼26℃夜22℃温度，光照16h黑暗8h，光照强度为30-50μmol·m-2·s-1；诱导期间全程保湿，湿度为70%-85%；培养一周后，打开罩子的通气孔；开始毛状根诱导时，每周浇灌促根营养液一次，浇灌三周，所述促根营养液为在14Hoagland营养液内添加NAA，使得NAA终浓度为0.05-0.1mgL；（6）复合型转基因植株培养。
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