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申请/专利权人：武汉新华扬生物股份有限公司

摘要：本发明提供一种使用核糖核酸酵母RNA检测全能核酸酶活性的方法，属于核酸酶检测技术领域。该方法以从核糖核酸酵母中提取的RNA作为底物，将未知酶活性的全能核酸酶用酶稀释液稀释后，与RNA混合得到待测样品溶液，在恒温水浴下进行酶促反应；以酶稀释液和RNA的混合溶液作为空白对照溶液；分别测定待测样品溶液和空白对照溶液于不同时间在260nm处的吸光度，以二者吸光度差值为纵坐标，以检测时间为横坐标绘制标准曲线，控制标准曲线的斜率k为0.002～0.0045，根据酶活计算公式计算酶活。该方法操作简单，提取RNA的方法简单，试剂成本低廉，检测过程安全，准确度高适用范围广。

主权项：1.一种使用核糖核酸酵母RNA检测全能核酸酶活性的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、用置于冰上预冷的酶稀释液将全能核酸酶稀释F倍，得到待测酶液；所述酶稀释液为含有Mg2+和白蛋白的Tris-HCl缓冲液；提取核糖核酸酵母的RNA，配制成RNA溶液，置于0～4℃预冷；S2、将体积为v的所述待测酶液与所述RNA溶液按体积比1:20混合均匀，得到总体积为V的待测样品溶液；将所述酶稀释液与所述RNA溶液按体积比1:20混合均匀，得到空白对照溶液；同时将所述待测样品溶液和所述空白对照溶液置于恒温水浴锅中，开始计时；S3、每隔一段时间取一定体积的水浴孵育后的所述待测样品溶液加入到等体积的冰上预冷的高氯酸溶液中，冰浴30min，然后于4℃下离心，取上清液，测量所述上清液在260nm处的OD值；按照与所述待测样品溶液同样的处理方法测量所述空白对照溶液在260nm处的OD值；S4、用在不同取样时间点t时取样检测得到的所述待测样品溶液的OD值减去对应时间点检测得到的所述空白对照溶液的OD值，得到不同取样时间点t的吸光度差值ΔA；以时间点t为横坐标，吸光度差值ΔA为纵坐标，绘制标准曲线；标准曲线的斜率k为0.002～0.0045；根据如下公式计算全能核酸酶的酶活： 其中，X为所述待测样品溶液中全能核酸酶的酶活力，单位为UmL；ΔA：以步骤S2中开始计时的时间为0计算，在取样时间点t时所述待测样品溶液在260nm处的吸光度与所述空白对照溶液在260nm处的吸光度的差值；V：所述待测样品溶液的总体积，单位为mL；v：步骤S2所述待测样品溶液中所述待测酶液的体积，单位为mL；Vv＝21:1；t：步骤S3中每次取样时所述待测样品溶液在恒温水浴锅中的孵育时间，单位为min；2：步骤S3中一定体积的水浴孵育后的所述待测样品溶液的稀释系数；30：30min定义一个酶活单位。

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