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申请/专利权人：辽宁省农业发展服务中心

摘要：本发明属于体外受精技术领域，具体的说是一种优化的鹿专用体外受精液的配制方法，该方法包括以下步骤：S1、针对DSOF液进行保存液的配置；S1.1、配制浓度为0.0083gmL的MgSO4，1mL分装，于‑20℃中冻存；S1.2、配制浓度为0.0301gmL的CaCL2·2H2O，1mL分装，于‑20℃中冻存；S1.3、配制浓度为0.0036gmL的丙酮酸pyruvate，1mL分装，于‑20℃中冻存；S1.4、配制浓度为0.0292gmL的谷氨酰胺L‑Glutamine，1mL分装，于‑20℃中冻存；通过对改良后的DSOF液进行了进一步的优化研究，最终形成了优化DSOF液，相较于改良DSOF液，本优化DSOF液比原始配方DSOF液更加简洁，大大缩短了配液程序及对节省了试剂开支，同时增加了在体外受精18h精子活率，使得梅花鹿的体外受精卵至少可发育到桑葚胚阶段，卵裂率也提高到了50％以上。

主权项：1.一种优化的鹿专用体外受精液的配制方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：S1、针对DSOF液进行保存液的配置；S1.1、配制浓度为0.0083gmL的MgSO4，1mL分装，于-20℃中冻存；S1.2、配制浓度为0.0301gmL的CaCL2·2H2O，1mL分装，于-20℃中冻存；S1.3、配制浓度为0.0036gmL的丙酮酸pyruvate，1mL分装，于-20℃中冻存；S1.4、配制浓度为0.0292gmL的谷氨酰胺L-Glutamine，1mL分装，于-20℃中冻存；S1.5、配制每毫升含0.0075g青霉素和0.0050g链霉素的混合液，1mL分装，于-20℃中冻存；S1.6、配制浓度为20μgmL的亚牛磺酸，50μL分装，于-20℃中冻存；S1.7、配制浓度为5μgmL的肝素，50μL分装，于-20℃中冻存；S2、基础液的配制；S2.1、用万分之一的分析天平，秤取100mMNaCL、6mMKCL、1.5mMCa-Lactate和25mMNaHCO3于20～40mL的电导率为18.2Ω的超纯水中进行溶解。然后倒入100mL的容量瓶中，依次加入100μl酚红、1mL冻存的丙酮酸、1mL冻存的谷氨酰胺、1mL冻存的青链霉素混合液、1mL非必须氨基酸、2mL必须氨基酸、1mL冻存的MgSO4和1mL冻存的CaCL2·2H2O，用超纯水定溶后反复颠倒容量瓶10～20次。最后用0.22um的滤器进行过滤，于4℃环境下保存备用不超过6个月；S3、使用液的配制以20mL使用液为例；S3.1、用万分之一的分析天平，秤取20mgBSA,注入16mL基础液进行溶解，然后依次加入4mL绵羊血清或发情绵羊血清、50μL冻存的亚牛磺酸和50μL冻存的肝素进行充分混合；混合后用0.22um的滤器进行过滤形成使用液，从而得到优化DSOF液；该使用液可于4℃环境下保存7天。

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