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申请/专利权人：大连大学

摘要：本发明属于微生物工程领域，公开了一种低温生淀粉糖化酶产生菌筛选方法。仅通过无碘液添加透明圈初筛结合酶活及扫描电镜复筛即可成功筛选生淀粉糖化酶产生菌株。不仅可以有效避免碘液对菌株的不利影响，防止一些潜在有价值的菌株因碘液反应而被错误地判定为阴性。还能更准确地识别和筛选出具有生淀粉糖化酶产生能力的菌株，从而提高筛选的效率和准确性。这种方法在微生物筛选和酶工程领域具有一定的应用价值和发展潜力。

主权项：1.一种低温生淀粉糖化酶产生菌筛选方法，其特征是，具体步骤如下：步骤一、无碘液添加透明圈初筛平板初筛培养基成分gL：玉米生淀粉20，酵母膏5，蛋白胨5，磷酸氢二钾1.5，七水硫酸镁0.5，氯化钾0.7，七水硫酸亚铁0.02，琼脂20，pH6.0，121℃，灭菌20min，然后在50℃左右无菌操作加入生玉米淀粉；将处理的菌悬液进行富集，25℃，150rmin，振荡培养24h；取1mL的菌液，用无菌水进行系列梯度稀释，充分混匀，分别取稀释后菌悬液涂布于初筛培养基上，于25℃条件下培养并时刻观察其生长状态，当培养基上出现透明圈后，分离纯化不同形态且透明圈大的菌株；步骤二、酶活及扫描电镜复筛摇瓶复筛培养基成分gL：玉米生淀粉40，蛋白胨10，酵母浸粉10，K2HPO40.5，MgSO4.7H2O0.5，NaCl0.5，KCl0.5，pH6.0，121℃，灭菌20min，然后在常温下无菌操作加入生玉米淀粉；挑取纯化后的单菌落接种于50mL种子培养基中，25℃、150rmin条件下培养24h，获得种子液；种子液以1vt％的接种量转接于发酵培养基，25℃、150rmin发酵48h，通过酶活检测及扫描电镜观察生淀粉水解情况进行复筛；酶活检测方法：发酵液于4℃下8000rmin离心10min，取上清液为粗酶液；于25mL圆底离心管中加入1.0mL2％WV的生玉米淀粉悬浮液，生玉米淀粉悬浮液由0.1molLpH6.0的Na2HPO4-KH2PO4缓冲液配制，25℃预热10min；加入5.0mL的酶液，25℃、150rmin恒温振荡反应1h，加入0.5mL4％NaOH溶液终止反应，取粗酶液测定还原糖量，并计算发酵液的酶活UmL；筛选得到低温生淀粉糖化酶产生菌。

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