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申请/专利权人：四川大学
摘要：本发明提供的一种重组CRM197蛋白在原核体系中可溶性表达及高效纯化的方法，该方法利用两个及以上的Sumo序列串联融合的方法，实现CRM197蛋白在大肠杆菌表达体系中的可溶性表达，避免了传统大肠杆菌体系表达CRM197蛋白形成包涵体，避免CRM197蛋白以无结构、无活性的包涵体形式表达，避免下游进行CRM197蛋白复性的工序；并通过简单的层析步骤从组分复杂的细菌破碎上清液体系中高效纯化得到CRM197蛋白；具有操作简便，适合规模化放大、周期短、纯度高、工艺稳定等特点。
主权项：1.一种可溶性表达及高效纯化重组CRM197蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、将CRM197蛋白基因序列的5’末端与两个及以上的Sumo蛋白串联序列的C端拼接，获得His-Sumon-CRM197n为≥2，自然数的基因序列；步骤2、将步骤1得到的His-Sumon-CRM197的基因序列插入原核体系表达质粒载体中，之后将质粒载体转入原核感受态细胞中；步骤3、通过抗性涂板挑选优势生长菌落，进行扩大培养，通过加入IPTG并降低温度进行诱导目的基因的表达得到融合蛋白His-Sumon-CRM197；步骤4、裂解菌体，离心获得上清液，通过第一次金属螯合层析从上清液中纯化获取较高纯度重组His-Sumon-CRM197融合蛋白，经ULP1酶酶切除去His-Sumon融合序列后，再通过第二次金属螯合层析，得到重组CRM197蛋白。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 四川大学 一种重组CRM197蛋白在原核体系中可溶性表达及其高效纯化的方法
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