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申请/专利权人：中国海洋大学

摘要：本发明涉及一种脂质体，具体涉及一种负载噬菌体内溶素的阳离子瓜尔胶脂质体、其包被液及应用，属于生物技术领域。所述脂质体包被液包括：有效量的磷脂、胆固醇和弹性增强剂，以及噬菌体内溶素0.1‑0.8mgmL，阳离子瓜尔胶；包被液中，噬菌体内溶素与阳离子瓜尔胶的重量比为1：1至1：15。脂质体及其包被液对副溶血弧菌具有有效的杀菌活性，经过高温和冻干处理后仍保留很强的杀菌活性。在蛤蜊养殖过程中应用可有效杀灭水体环境中的副溶血弧菌，杀菌率最高在99%以上，减少蛤蜊副溶血弧菌的污染。且对污染了副溶血弧菌的蛤蜊具有很好的净化作用，脂质体添加至热变性内溶素终浓度25µgmL时对蛤蜊体内副溶血弧菌杀菌率超过90%。

主权项：1.一种脂质体包被液，其特征是所述的脂质体包被液的制备方法包括以下步骤：S1、内溶素的预处理：利用大肠杆菌表达重组噬菌体内溶素，热处理使其部分变性后，离心除去沉淀获得内溶素溶液；热处理的温度为70±2℃，加热时间1-6min；S2、磷脂膜的制备：将大豆卵磷脂80µg、胆固醇20µg和聚山梨醇酯808-12µL溶解于有机溶剂的混合体系中得到预混物，将预混物旋蒸，在容器的内壁上形成磷脂膜，干燥；S3、磷脂膜的水合：向步骤S1制得的内溶素溶液中加入阳离子瓜尔胶，得到的混合液加入步骤S2所述的容器中，旋蒸，以使磷脂膜与容器壁分离，充分水化溶于混合液中得到分散体混合液；混合液体系中，噬菌体内溶素浓度为200µgmL，所述的阳离子瓜尔胶添加浓度为2-3mgmL；S4、脂质体包被液的制备：所得分散体混合液经水浴超声处理后，得到脂质体包被液；所述噬菌体内溶素为副溶血弧菌噬菌体内溶素，该噬菌体内溶素的制备方法包括：将可表达内溶素的工程菌RosettaLysqdvp001接种于5mL含有50μgmL卡那霉素的LB液体培养基中，37℃振荡过夜培养；次日，按照1：50的比例将过夜培养的菌液加入到新鲜的LB液体培养基中，37℃150rmin培养2-3h；加入IPTG至终浓度为1mmolL，25℃150rmin诱导4h；然后在4000rmin，4℃条件离心20min，去上清，用含20mmolLNa2HPO3，500mmolLNaCl，pH8.0的缓冲液复融细菌沉淀，混合均匀后进行超声破碎，然后8000rmin离心30min去除不溶性细胞碎片，过0.22µm滤膜，获得粗酶液；采用NiSepharoseTM6FastFlow进行纯化，利用10kD超滤管进行脱盐处理获得纯度较高的内溶素。

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权利要求：

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