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申请/专利权人：华中科技大学
摘要：本发明公开了一种毕赤酵母高效无痕基因敲除载体及其应用，属于微生物基因工程领域。本发明毕赤酵母高效无痕基因敲除载体包括两个不同条件诱导的压力基因表达盒、筛选基因表达盒、待敲除片段的上、下游同源序列及该片段内部同源序列；本发明中敲除载体单交换整合入目的位点后，通过引导两轮分子内重组后即可高效地实现基因无痕敲除。本发明不需抑制NEHJ途径，仅需单个载体即可非常高效地实现毕赤酵母中基因的无痕敲除。
主权项：1.一种毕赤酵母无痕基因敲除载体，其特征在于，该载体包括目的片段5′端上游同源序列、目的片段3′端下游同源序列、目的片段内部同源序列、由A条件诱导的毕赤酵母压力基因表达盒、由B条件诱导的毕赤酵母压力基因表达盒、毕赤酵母正向筛选标记、大肠杆菌筛选标记和复制起点；所述目的片段为待敲除的片段；所述A条件和B条件为两种不同的诱导条件；所述敲除载体上，目的片段5′端上游同源序列、目的片段3′端下游同源序列和目的片段内部同源序列的方向与这三个序列在毕赤酵母基因组上原有的方向一致，且所述目的片段5′端上游同源序列与目的片段3′端下游同源序列的5′端直接连接形成紧邻片段；所述敲除载体上，由A条件和B条件诱导的毕赤酵母压力基因表达盒这两个片段不直接相连，这两个表达盒的两端在载体上分别被所述紧邻片段和所述目的片段内部同源序列隔开；所述敲除载体上，当毕赤酵母正向筛选标记位于目的片段5′端上游同源序列的5′端和目的片段内部同源序列的3′端之间时，以目的片段3′端下游同源序列或目的片段同源序列作为该敲除载体单交换整合毕赤酵母时的同源臂；当毕赤酵母正向筛选标记位于目的片段3′端下游同源序列的3′端和目的片段内部同源序列的5′端之间时，以目的片段5′端上游同源序列或目的片段同源序列作为该敲除载体单交换整合毕赤酵母时的同源臂。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 华中科技大学 一种毕赤酵母高效无痕基因敲除载体及其应用
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