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摘要：本发明公开了一种基于EDC调控的单个CRISPR‑Cas12a系统建立肺炎克雷伯菌毒力基因双重检测方法，属于生物传感器检测技术领域，包括建立EDC反应体系、CRISPR‑Cas12a反应体系和EDC调控CRISPR‑Cas12a系统双重检测hvKp毒力基因检测体系，本研究EDC反应根据不同的靶标释放不同的荧光探针，进而调控CRISPR‑Cas12a的反式切割活性达到双重检测的目的。此外，通过引入ssRNAFuel有效避免了CRISPR‑Cas12a对底物的非特异性切割，实现了单管一体式检测。该检测方法在反应25min左右时便可以检测到rmpA、peg‑344的mRNA，检测水平接近fM，达到了快速检测的目的。同时，该方法也能够准确的识别出rmpA、peg‑344两种特异性靶标序列，展示出了良好的特异性。
主权项：1.一种基于EDC调控的单个CRISPR-Cas12a系统建立肺炎克雷伯菌毒力基因双重检测方法，其特征是：包括建立EDC反应体系、CRISPR-Cas12a反应体系和EDC调控CRISPR-Cas12a系统双重检测hvKp毒力基因检测体系；所述EDC联合CRISPR-Cas12a系统双重检测hvKp毒力基因检测体系包括：利用两个EDC分别对rmpA和peg-344mRNA靶标识别和扩增，通过EDC释放的ssDNA产物级联启动单个CRISPR-Cas12a系统，进而输出两种与靶标对应的荧光信号，建立EDCCRISPR-Cas12a荧光检测。
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百度查询： 贵州省人民医院 一种基于EDC调控的单个CRISPR-Cas12a系统建立肺炎克雷伯菌毒力基因双重检测方法
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