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申请/专利权人：诺维信公司
摘要：本发明涉及一种通过抑制条件性必需基因进行反向选择的方法。
主权项：1.一种用于将至少一种目的多核苷酸插入至宿主细胞基因组的方法，所述方法包括以下步骤：a提供宿主细胞，所述宿主细胞在其基因组中包含以下：i.编码包含靶序列的选择性标记的多核苷酸，所述靶序列侧接针对II类Cas9蛋白的功能性PAM序列；ii.编码gRNA的至少一种多核苷酸，所述gRNA与靶序列至少95％互补并且能够与所述靶序列杂交；以及iii.编码II类Cas9蛋白的无效核酸酶变体的多核苷酸，所述II类Cas9蛋白能够与gRNA相互作用并与靶序列结合，从而抑制选择性标记的表达；b用至少一种目的多核苷酸转化所述宿主细胞，并且所述至少一种目的多核苷酸能够使所述编码gRNA的至少一种多核苷酸失活；c选择由选择性标记赋予的性状；以及d识别转化的宿主细胞，其中所述编码gRNA的至少一种多核苷酸已被所述至少一种目的多核苷酸灭活。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 诺维信公司 通过抑制条件性必需基因进行反向选择
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