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申请/专利权人：中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所

摘要：本发明公开了一种柱花草诱导转基因毛状根的方法及制备原生质体的方法，柱花草诱导转基因毛状根的方法包括外植体的获得：切取萌发后的光果柱花草幼苗的子叶节为外植体；侵染及共培养：将外植体放入携带有目的基因的重组发根农杆菌Ar1193侵染液中浸泡，得到侵染后的外植体，吸干外植体表面的侵染液，将外植体置于MS固体培养基上暗培养；诱导及筛选：暗培养完成后，吸去表面液体残留，将外置体插入添加抗生素的诱导培养基中进行诱导及筛选，初步得到转基因毛状根；将转基因毛状根转移至继代培养基中继代培养。本方法毛状根诱导率达到96.7％，毛状根阳性率达100％；本发明建立的利用柱花草转基因毛状根制备原生质体的方法，获得的原生质体细胞100％为转基因细胞。

主权项：1.一种柱花草诱导转基因毛状根的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：外植体的获得：切取萌发后的光果柱花草幼苗的子叶节为外植体；S2：侵染及共培养：将外植体放入携带有目的基因的重组发根农杆菌Ar1193侵染液中浸泡，分离得到侵染后的外植体，吸干外植体表面的侵染液，将外植体置于MS固体培养基上暗培养；S3：诱导及筛选：暗培养完成后，使用抑菌剂清洗外植体并吸去表面液体残留，将外置体插入添加抗生素的诱导培养基中进行诱导及筛选，初步得到转基因毛状根；S4：继代培养：将转基因毛状根转移至继代培养基中，继代培养；在步骤S1中，取萌发2天后的光果柱花草幼苗，在子叶节下0.5~1.0cm处切除下胚轴，切开两片子叶节，在每片子叶节上分别划出伤口，得到所述外植体；在步骤S3中，所述添加抗生素的诱导培养基组成为：2.21g·L-1MS、2%蔗糖、200mg·L-1特美汀、8mg·L-1潮霉素B、3.5g·L-1植物凝胶；步骤S4中，继代培养的具体过程包括：将转基因毛状根从诱导培养基中转移至固体继代培养基中，25℃黑暗条件下培养，增殖5~10天后，去除子叶，每7天更换一次培养基，更换2~4次培养基后，取毛状根在无菌条件下用手术刀切割下长约5～7cm的根尖部分，将根尖部分置于新配制的液体继代培养基中在相同条件下继代培养；所述固体继代培养基组成为：12MS、2%蔗糖、3.5g·L-1植物凝胶；所述液体继代培养基组成为：12MS、2%蔗糖。

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百度查询： 中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所 柱花草诱导转基因毛状根的方法及制备原生质体的方法