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申请/专利权人：DNA斯克瑞普特公司
申请日：2020-07-28
公开（公告）日：2024-07-05
公开（公告）号：CN114430778B
主分类号：C12P19/34
分类号：C12P19/34
优先权：["20190801 EP 19189639.8","20191001 EP 19200740.9"]
专利状态码：有效-授权
法律状态：2024.07.05#授权;2022.05.20#实质审查的生效;2022.05.03#公开
摘要：本发明涉及使用抑制DNA二级结构包括但不限于链内和链间双链体、G‑四链体等形成的链延长条件进行多核苷酸的无模板酶促合成的方法和试剂盒。在一些实施方案中，这样的链延长条件包括使用抑制正在合成的多核苷酸中氢键键合的碱基保护基团或碱基类似物的3’‑O‑封闭的dNTP单体。
主权项：1.一种合成具有预定序列的多核苷酸的方法，所述方法包括以下步骤：a提供具有游离3’-羟基的起始子；以及b重复以下的循环直至合成所述多核苷酸：i在延长条件下使具有游离3’-O-羟基的起始子或延长片段与3’-O-封闭的核苷三磷酸和末端脱氧核苷酸转移酶TdT接触，从而使所述起始子或延长片段通过3’-O-封闭的、碱基保护的核苷三磷酸的掺入被延长以形成3’-O-封闭的延长片段，和ii将所述延长片段去封闭以形成具有游离3’-羟基的延长片段，直至形成所述多核苷酸，其中所述3’-O-封闭的、碱基保护的核苷三磷酸包含3’-O-封闭基团和附接至所述碱基的碱基保护部分，其中选择所述延长条件以防止氢键键合或碱基堆积，其中所述碱基保护部分附接至脱氧腺苷三磷酸的6-氮、脱氧鸟苷三磷酸的2-氮或脱氧胞苷三磷酸的4-氮，其中附接至所述脱氧腺苷三磷酸的6-氮的所述碱基保护部分选自由以下组成的组：苯甲酰基、邻苯二甲酰基、苯氧基乙酰基、甲氧基乙酰基和二甲基甲脒；其中附接至所述脱氧鸟苷三磷酸的2-氮的所述碱基保护部分选自由以下组成的组：异丁酰基、异丁酰氧基乙烯、乙酰基、4-异丙基-苯氧基乙酰基、苯氧基乙酰基、甲氧基乙酰基和二甲基甲脒；并且其中附接至所述脱氧胞苷三磷酸的4-氮的所述碱基保护部分选自由以下组成的组：苯甲酰基、邻苯二甲酰基、乙酰基和异丁酰基。
全文数据：
权利要求：
百度查询： DNA斯克瑞普特公司 增加多核苷酸的无模板酶促合成中长序列的产量
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