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申请/专利权人：杭州联川生物技术股份有限公司
摘要：本发明公开了一种基于固相合成对寡核苷酸进行rApp修饰的方法，属于寡核苷酸修饰技术领域。所述方法首先对化学固相合成结束的目的寡核苷酸序列进行亚磷酸化修饰，随即对其进行亚磷酰胺活化，最终与腺苷磷酸进行耦合反应，得到的终产物在浓氨水切割后与未耦合修饰成功的产物进行分离纯化。利用本发明的方法对寡核苷酸序列进行rAPP修饰，得到的rAPP修饰产物产量高并且纯度高，可将现在技术中1％的化学合成产率提升至10％以上，并且产物的纯度达到90％以上。
主权项：1.一种基于固相合成对寡核苷酸进行rApp修饰的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1，亚磷酸修饰：获得含有目的寡核苷酸序列的用于固相合成的固相支持物，与亚磷酸二苯酯吡啶溶液进行混合，静置反应20～50min，对固相支持物进行第一清洗并干燥；S2，亚磷酰胺活化：将经步骤S1处理后的固相支持物与活化试剂混合，28～35℃下静置3～8h，对固相支持物进行第二清洗并干燥，其中，所述活化试剂中包括：体积分数为15～25％的N,O-双三甲基硅烷基乙酰胺、质量体积分数为5～8％的咪唑、体积分数为35～40％的乙腈、体积分数为35～40％的四氯化碳和积分数为2～8％的三乙胺。S3，5'-腺苷酸偶联：取活化后的5'-腺苷酸或其衍生物与经步骤S2处理后的固相支持物混合，28～35℃下静置15～20h，对固相支持物进行第三清洗并干燥；S4，rApp修饰后处理和纯化：利用1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯对含有rApp修饰的寡核苷酸的固相支持物进行处理，再使用浓度为22～25％氨水在55℃条件下氨解，最后进行乙醇沉淀和HPLC纯化。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 杭州联川生物技术股份有限公司 一种基于固相合成对寡核苷酸进行rApp修饰的方法
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