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申请/专利权人：江苏艾尔康生物医药科技有限公司
申请日：2022-12-26
公开（公告）日：2024-06-28
公开（公告）号：CN118256418A
主分类号：C12N5/071
分类号：C12N5/071
优先权：
专利状态码：在审-公开
法律状态：2024.06.28#公开
摘要：本发明公开了一种视网膜色素上皮细胞及其制备方法，该方法制备过程简单程序化，可规模化开发，细胞产量高，满足临床级细胞需求、疾病建模和药物筛选等。本发明提供的体外分化获取的视网膜色素上皮细胞的鉴定方法，可以被用于进行视网膜色素上皮细胞的质量控制，为未来使用视网膜色素上皮细胞治疗眼底退行性疾病铺平道路。
主权项：1.一种人源视网膜色素上皮细胞的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1培养器皿包被：将无动物源重组人玻璃粘连蛋白溶液包被工作液加入培养器皿中，在37℃条件下孵育1h～4h；2人诱导多能干细胞iPSC的复苏培养：取出冷冻的iPSC细胞，并复苏培养于含有iPSC维持培养基的上述步骤1中已包被的培养器皿中；3人诱导多能干细胞iPSC的传代培养：待上述步骤2培养的细胞达到80％以上进行传代，采用无动物源成分细胞消化溶液消化细胞，形成单细胞悬液培养于含有iPSC维持培养基的上述步骤1中已包被的培养器皿中，并加入小分子抑制剂培养18～30h；4制备拟胚体：待上述步骤3培养的细胞达到80％以上进行消化，采用无动物源成分细胞消化溶液消化细胞，形成单细胞悬液培养于含有iPSC维持培养基的低细胞粘附性培养器皿中，并加入小分子抑制剂培养18～30h后观察拟胚体的形成；5拟胚体的预分化：将上述步骤4拟胚体从iPSC维持培养基逐步转移至诱导分化培养基A，然后将拟胚体转移至含有诱导分化培养基A的经基质胶包被的培养器皿中培养2～4天；6分化增殖初步培养：逐步将上述步骤5诱导分化培养基A替换为诱导分化培养基B，然后培养11±2天；7分化增殖成熟培养：逐步将上述步骤6诱导分化培养基B替换为诱导分化培养基C，然后培养80±5天；8分化增殖成熟扩增：根据上述步骤7细胞的生长情况，每隔20±5天，将上述步骤7分化增殖成熟培养的细胞进行传代，采用无动物源成分细胞消化溶液消化细胞，形成单细胞悬液培养于含有诱导分化培养基C的经基质胶包被的培养器皿中，静置培养24～48h后换液。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 江苏艾尔康生物医药科技有限公司 视网膜色素上皮细胞及其制备方法和应用
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