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申请/专利权人：湖北省药品监督检验研究院

摘要：本发明公开了一种基于多重连接探针扩增技术对中药材桃仁与苦杏仁进行鉴别的方法，它包括以下步骤：1提取样品基因组DNA；2以提取的基因组DNA为模板，利用特异性引物扩增桃仁和苦杏仁的核基因片段并纯化扩增产物；3将MLPA探针与纯化产物进行杂交；4利用DNA连接酶将杂交产物进行连接；5利用通用引物对连接产物进行实时荧光定量PCR扩增；6收集熔解曲线信号，观测Tm值。本发明能够在较短的时间内快速鉴别中药材桃仁和苦杏仁，并可有效检测出掺混样品，该方法具有特异性强，灵敏度高等优点，在中药材真伪鉴定领域有很好的应用前景。

主权项：1.一种基于多重连接探针扩增技术对中药材桃仁与苦杏仁进行鉴别的方法，其特征在于包括以下步骤：1）提取样品基因组DNA；2）以步骤1）的基因组DNA为模板，利用特异性引物扩增桃仁和苦杏仁的核基因片段序列并纯化扩增产物；3）将MLPA探针与纯化产物进行杂交；4）利用DNA连接酶将步骤3）的杂交产物进行连接；5）利用通用引物对步骤4）的连接产物进行实时荧光定量PCR扩增；6）收集熔解曲线信号，观测Tm值，其中，所述MLPA探针共3条，由特异性的桃仁、苦杏仁左探针和共同右探针组成，探针序列如下：桃仁左探针：5′-GGGTTCCCTAAGGGTTGGACCGGCGCGCATCAAGGGCTCGAAAAAATGCTC-3′苦杏仁左探针：5′-GGGTTCCCTAAGGGTTGGACTTAATATCAAGGGCTCGAAAAAATTGCCG-3′共同右探针：5′-GGCTCCAGCTCAGCTTTCAACGTCTAGATTGGATCTTGCTGGCAC-3′；用于扩增所述核基因序列的特异性引物的上游引物和下游引物序列如下；上游引物:5′-CCATCTACTCCTTCGGGAT-3′下游引物:5′-GTTCGCTCGCCGTTACTAG-3′；所述通用引物的上游引物和下游引物序列如下：PrimerF:5′-GGGTTCCCTAAGGGTTGGA-3′PrimerR:5′-TCTAGATTGGATCTTGCTGGCAC-3′；所述MLPA探针中，桃仁左探针、苦杏仁左探针、共同右探针的体积比为1.4：0.2：1.6。

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