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申请/专利权人：中山大学
申请日：2021-07-13
公开（公告）日：2024-06-14
公开（公告）号：CN113637697B
主分类号：C12N15/70
分类号：C12N15/70;C12N15/66;C12N7/01;A61K35/76;A61K39/12;A61P31/14
优先权：
专利状态码：有效-授权
法律状态：2024.06.14#授权;2021.11.30#实质审查的生效;2021.11.12#公开
摘要：本发明构建了登革病毒血清4型DENV‑4全长感染性克隆pZG14D4。本发明使用真核转录载体pTight，通过在启动子前加入7xTRE四环素应答元件以降低蛋白在细菌中的渗漏表达的方法，构建出了DENV‑4感染性克隆pZG14D4。该系统能成功且高效地拯救出活病毒，在转染后第二天即可观察到病毒阳性的细胞，第五天上清中病毒的滴度可达到106FFUml。在细菌中连续传代五次的基因组cDNA克隆经测序无碱基突变亦无杂峰，转染进Huh7.5细胞，仍能产生高滴度的病毒105FFUml，说明该质粒能在细菌内稳定复制，具有遗传稳定性。拯救出的子代病毒与亲代病毒在体外的增殖的生长曲线相当。
主权项：1.一种DENV-4全长感染性克隆，其特征在于，所述DENV-4全长感染性克隆的序列为SEQIDNO：1所示；构建全长感染性克隆时使用的载体是pTight载体，载体上包含了pBR322来源的高拷贝复制原点、七次四环素应答元件、巨细胞病毒真核启动子、丁型肝炎病毒核酶的反基因组序列和猴病毒40聚腺苷酸化信号序列、氨苄青霉素抗性元件。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 中山大学 一种DENV-4全长感染性克隆及其构建方法
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